生姜透皮贴对运动病大鼠脑组织中三种酶活性的影响.docVIP

　　生姜透皮贴对运动病大鼠脑组织中三种酶活性的影响 ：康照昌 李玉荣 敖明章 【摘要】 目的 通过建立运动病模型，检测生姜透皮贴对运动病大鼠脑组织中碱性磷酸酶(AOP)、Na+K+ATP酶和细胞色素氧化酶(CCO)活性的变化，并探讨其 治疗 运动病的机制。方法 雄性SD大鼠40只，随机分5组，每组8只，每天按实验方法刺激，同时实验组给予生姜透皮贴治疗。实验第3天刺激结束后迅速断头处死，冰上迅速分离脑组织，取大脑皮质和小脑皮质、脑干前庭区。采用组织化学定位方法和图像定量分析方法，检测各组大鼠上述三部位脑组织中ALP、Na+K+ATP酶及CCO活性。结果 运动病大鼠三部位脑组织中ALP活性显著升高、Na+K+ATP酶及CCO活性明显降低。与模型组相比，使用生姜透皮贴后运动病大鼠三部位脑组织中ALP活性显著减低、Na+ K+ATP酶及CCO活性明显升高。结论 生姜透皮贴可能通过降低脑血管紧张度，改善脑血流的分布，增加脑血流量，调整脑细胞内CCO、ALP、Na+K+ATP酶等酶的活性，增强脑细胞的兴奋性，从而保持中枢神经系统的兴奋性，起到抗运动病的作用。 【关键词】 生姜透皮贴;运动病;碱性磷酸酶;Na+K+ATP酶;细胞色素氧化酶 　 随着 现代 航天航海事业的 发展 ，世界各国都在开展运动病的研究工作，对防治运动病的研究已经取得了一定的成果，但尚无公认的疗效确切、副作用少的治疗措施。寻找更为有效、更安全的抗运动病方法日益引起国内外重视。目前的抗运动病药物主要包括抗胆碱、抗组胺类及拟交感胺类等，虽有一定的抗运动病作用，但多有中枢抑制作用，限制了其临床使用。而我国自古就应用中草药生姜抗眩晕病，生姜有确切的抗运动病防止晕车、晕船的作用〔1〕。美国 科学 家也证明生姜确有防晕船等效果〔2〕，且相对其他防晕船药物相比，无口干，昏睡，血压降低等副作用。近年来，国内学者进行的动物实验证实，生姜的有效成分有明显的止吐抗运动病的作用〔3〕，且无明显副作用。南通医学院航海医学研究所与南通市中 医院 联合研究的生姜合剂由生姜、半夏等6味中药组成〔4〕，及单独的生姜粉等用于防治运动病，效果较晕海宁强，副作用不明显，因而生姜成为各国学者普遍看好的新的抗运动病药物。本实验运用乙醇法提取生姜有效成分，将其与透皮剂氮酮混合制成帖剂贴在运动病大鼠的脐部〔5〕，测定大鼠大脑皮质、小脑皮质、脑干前庭区脑细胞中Na+K+ATP酶、碱性磷酸酶(ALP)、细胞色素氧化酶(CCO)活性变化〔6〕，透皮疗法使药效发挥更加持久，而且方法简便，作用迅速〔7〕，为抗运动病新型药物的研究提供新的思路。 　　 1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 雄性SD大鼠40只、体重(200±10) g，购自湖北省实验动物中心，动物合格证号：SYXK(鄂)20030007，检疫后备用。单笼饲养，自由摄食水，饲养1 in。随后给予2 h的运动病刺激：将大鼠无束缚地放入旋转装置中的有机玻璃笼内，先顺时针方向加速度从16°/S2加速至120°/S2，然后立即以45°/S2减速至0，马上逆时针再以16°/S2加速至120°/S2，然后以45°/S2减速至0，如此反复。旋转时间为2 h〔8〕，除正常组不接受旋转刺激外，其他各组处理相同，旋转刺激完成后动物放回饲养笼中。连续刺激3 d，1次/d。每天观察动物接受刺激后的反应情况，第3天刺激结束后取动物迅速断头处死，冰上迅速分离脑组织，取出大鼠三部位脑组织，放入液氮，转入-80℃冰箱备用。 　　1.2 药品与材料 生姜透皮贴：生姜(华中科技大学鉴定)清洗去杂切碎，双蒸水浸泡，闪式提取器提取，过滤，滤液减压浓缩至浸膏状，按50、100和200 mg/kg将生姜浸膏与氮酮混匀，制成3 cm×4 cm生姜透皮贴，另用氮酮制作空白贴剂供模型组使用。ALP试剂盒(批号：060101)、Na+K+ATP酶试剂盒(批号：060101)、CCO试剂盒(批号：060101)均购自南京建成生物工程研究所。 　　1.3 实验仪器 低温高速离心机(Backman)、电热恒温水温箱 (上海医疗器械七厂)、721分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。 　　1.4 酶细胞化学反应 将组织用含2%多聚甲醛、0.5%戊二醛的二甲砷酸钠缓冲液固定液(pH1.4　0.1 mol/L) 4℃固定1 h。二甲砷酸钠缓冲液漂洗后，与液氮冷冻后两组样品并列放在一起,恒冷箱冷冻切片为10 μm，分别测定进行Na+K+ATP酶、ALP和CCO〔9〕。用1%锇酸固定1 h，EPON812包埋，LKB超薄片机切片，不进行 电子 染色，直接在HITACHIH300型电镜下观察。 　　1.5 酶活性定量分析 采用XY540型彩色图像分析系统定量分析〔10〕，12