喘可治注射液中朝藿定A，朝藿定B，朝藿定C和淫羊藿苷在大鼠体内的药物动力学研究.docVIP

喘可治注射液中朝藿定A，朝藿定B，朝藿定C和淫羊藿苷在大鼠体内的药物动力学研究 　　[摘要]研究喘可治注射液肌注给药后朝霍定A，朝藿定B，朝霍定C及淫羊藿苷的体内药动学规律。采用已建立的RRLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中朝藿定A，朝藿定B，朝藿定C及淫羊藿苷，并计算其药动学参数。结果显示，在该分析条件下，各成分在1～1000μg?L-1线性关系良好；日内精密度RsDmax分别为0.21，0.19，0.16，0.13 h，平均消除半衰期t1/2z，分别为0.60，0.62，0.47，0.49 h。结果表明该法快速、灵敏、特异，适用于大鼠血浆中朝藿定A，朝藿定B，朝藿定C及淫羊藿苷的测定。喘可治注射液中4种淫羊藿黄酮在大鼠体内血药浓度较低，吸收和消除均十分迅速，呈现类似的药动学特征。 　　[关键词]喘可治注射液；淫羊藿黄酮；RRLC-MS/MS；药物动力学 　　喘可治注射液由中药淫羊藿和巴戟天配伍组成，具有温肾补阳止咳平喘之功，主治哮证属肾虚挟痰证现代药理学研究表明，喘可治注射液可以通过下丘脑-内分泌-免疫网络发挥多环节调节作用，改善机体免疫功能，提高机体免疫能力，减少呼吸道感染及提高机体的应激能力，对于哮喘和反复性呼吸道感染的治疗临床有效率高，可达到长期缓解或根治的效果；不仅如此，喘可治注射液肿瘤的辅助治疗方面也表现出很好的疗效，在中医临床上具有非常重要的应用价值。 　　淫羊藿黄酮是喘可治注射液的主要效应成分C8位接有异戊烯基是这类黄酮共同的结构特征，它们也是淫羊藿专属性化学成分，主要包括朝藿定A（epimedin A），朝藿定B（epimedin B），朝藿定C（epimedin C），淫羊藿苷（icariin），icarisoside等。到目前为止，对喘可治注射液主要化学成分在体内的动力学过程还缺乏系统的探讨。本文运用液相色谱/质谱联用技术建立大鼠血浆中朝藿定A，朝藿定R，朝藿定C及淫羊藿苷4种黄酮的同时测定方法，并应用于喘可治注射液肌注给药后大鼠体内的药物动力学研究，探讨药物在体内的动力学规律，以期为喘可治注射剂临床合理用药提供科学的数据支持。 　　1材料 　　API 3000液质联用仪，美国AB公司，配有电喷雾离子源（ESI），Analyst 1.4数据采集软件：Agi-lent 1100型液相色谱系统：Eppendorf台式高速离心机；Waters固相萃取仪：AccuBondⅡODS-C18SPE柱（100 mg，1 mL），Agilent公司：美国Techne DB-30型样品浓缩仪；Branson 8510型超声波清洗仪。 　　喘可治注射液由广州万正药业有限公司提供，每支2 mL（批；朝藿定A（批号121106，纯度98.8%）和朝藿定B（批号121109，纯度98.6%）购自上海融禾医药科技有限公司；朝藿定C（批号111780-200801，纯度99.1%）、淫羊藿苷（批号0737-9910，纯度98.5%）及柚皮苷（批号0722-200108，纯度99.7%）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈购自Fisher公司，色谱纯；超纯水经Milli-Q系统纯化制备。 　　6只健康成年Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重（300+20）g，雄性，购于广东省动物实验中心，饲养于室温22～26℃，湿度为40%～70%，12 h昼夜更替的动物室内，实验前适应性喂养1周，给药前12 h禁食，全程不禁水。 　　2方法和结果 　　2.1色谱和质谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（150 mm×2.1 mm，5.0μm）：流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液（35：65），等度洗脱3.5 min；进样量5μL；柱温40℃：流速0.22 mL?min-1。电喷雾离子源（ESI）；多反应离子监测（MRM）负离子检测模式，用于监测离子对分别为：m/z 883.4测模式，用于朝藿定A，m/z 853.5测模式，用于朝藿定B，m/z 867.4→659.4朝藿定C，m/z 721.3→513.2淫羊藿苷，m/z 579.23→513内标柚皮苷；加热辅助气7.5 L?min-1；雾化气8 L?min-1；气帘气6 L?min-1；碰撞气10 L?min-1：离子源喷雾电压-4000 V；离子源雾化温度350℃。 　　2.2血浆样品处理 采用Waters固相萃取仪为固相萃取辅助装置，固相萃取小柱（Agilent C18）依次采用甲醇1 mL和水1 mL活化与平衡。取血浆样品100 μL，加入内标工作溶液10 μL，混匀，恒速上样，用蒸馏水1 mL淋洗，抽干，弃去洗脱液，而后用甲醇1 mL洗脱，收集洗脱液，35℃氮气流吹干。残渣加流动相150μL，充分溶解，通过0.2