褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响.doc

　　褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响 ：李东 武永刚 赵尔曼 杨秀玲 段力军 【摘要】 目的：探讨褪黑素对大鼠脊髓损伤后诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)表达的影响。方法：采用改良 Allen′s撞击法制备脊髓损伤模型；成年SD大鼠110只随机分为假损伤组、损伤组和药物 治疗 组3组，其中损伤组和药物治疗组各50只，分5个时间点（8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死；假损伤组10只，于手术后14天处死，采用HE染色和免疫组化检测脊髓损伤后脊髓组织中 iNOS蛋白的表达。结果：与损伤组比较,药物治疗组大鼠损伤后脊髓组织 iNOS表达明显降低,差异有统计学意义 (P＜0.05)。结论：褪黑素可通过抑制 iNOS蛋白表达对大鼠脊髓损伤起保护作用。 【关键词】 脊髓损伤;褪黑素;诱生型一氧化氮合酶 　　Abstract Objective：To investigate the influence of Melatonin on the induction of inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression in spinal cord upon spinal cord injury (SCI) in rats. Methods:SCI model ethod odification. One hundred and ten adult SD rats ly divided into three groups: sham injury group (n=10), the spinal cord injured group (n=50), and SCI elatonin treatment group (n=50). For the SCI groups elatonin treatment, rats e (8h, 24h, 72h, 7d, 14d). And rats of sham injury group munohistochemistry method ployed to detect iNOS expression in spinal cord. Results:Melatonin treatment significantly reduces the induction of iNOS expression in spinal cord of rats subjected to SCI operation(Plt;0.05 or 0.01). Conclusion:The result suggests that melatonin may exert protective effect on spinal cord injury through inhibiting the induction of iNOS expression. 　　Key elatonin,MT)主要是由松果体分泌的激素,能直接清除自由基,减轻细胞的过氧化损害[1]。本试验通过观察大白鼠脊髓损伤后腹腔注射褪黑素对iNOS表达的影响，分析褪黑素在脊髓继发性损伤中的可能作用，为临床治疗继发性脊髓损伤提供理论及实验依据，也为进一步实验研究提供资料。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要仪器与试剂 Olympus光学显微镜图像采集系统显微图像分析系统(日本)，褪黑素购自晶美北京分公司(瑞士Alexis公司生产)，兔抗大鼠iNOS多克隆抗体免疫组化试剂盒、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司提供。 　　1.2 实验动物与分组 健康成年SD大鼠110只,雌雄各半,体重250～330g。随机分为假损伤组、损伤组和药物治疗组3组。其中损伤组和药物治疗组各50只，分5个时间点（损伤后8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死；假损伤组10只，于手术后14天处死。药物治疗组术后立即给予褪黑素每天50mg/kg，腹腔注射，连用7天;而假手术组和损伤组给予等量含5%无水乙醇的生理盐水。 　　1.3 动物模型的建立 采用改良Allens撞击法，10%的水合氯醛按300mg/kg体重腹腔麻醉，俯卧位固定，常规碘伏消毒铺巾，以T10棘突为中心行背侧正中纵切约2.5cm,行T9、10椎板切除术，暴露硬脊膜，在硬膜表面垫一弯曲度与脊髓表面一致的塑料垫片,用重10g金属棒从4.0cm高处沿中空玻璃管垂直自由落下撞击脊髓，造成急性脊髓损伤，假手术组只做T9、10椎板切除术，显露硬脊膜，不用重物撞击。造模成功的标志为大鼠的双下肢呈回缩性扑动、尾巴出现痉挛性摆动。造模成功的动物每天给予截瘫护理，每日人工排尿排便3次。 　　1.4 取材和HE染色 将各组大鼠在各相应时