运动配合中药及艾灸对慢性疲劳综合症大鼠行为及外周血淋巴细胞凋亡的影响.doc

　　运动配合中药及艾灸对慢性疲劳综合症大鼠行为及外周血淋巴细胞凋亡的影响 ：邹军，苑建齐，吕爽，屠嘉衡，季明勇 【摘要】 　　目的探讨慢性疲劳综合症（GFS）造模对SD大鼠行为及外周血淋巴细胞凋亡的影响，并观察运动配合中药及艾灸作用效果。方法用48只Sprague - Daes等［1］将慢性或反复发作的极度疲劳为特征的症候群命名为慢性疲劳综合症(Chronic Fatigue Syndrome ,CFS)以来,世界很多国家的学者对此进行研究，拟定了相应的诊断标准。 　　该病的发生与长期精神紧张，脑力、体力长期过度劳累，并与神经、体液调节和免疫功能失调有关。特别是脑力劳动者尤为突出，对社会影响大，还没有安全、有效的药物和方法 治疗 ,护理调养费用较高，给社会卫生福利部门造成较大的压力［2］,因此引起了世界各国的广泛重视，开展了有针对性的研究。近年来，我国也开展有关CFS的基础与临床方面的研究工作，在发病机理，影响因素，症状表现等多有涉及。有关中医药治疗CFS的疗效与机理报道较多，但将运动配合中医药防治CFS的研究较少。 　　研究有关CFS模型的建立，不同学者方法不尽相同，我们采用慢性束缚、电击、冰水游泳无 规律 进行刺激的复合方法建立了包含体力和精神的慢性疲劳动物模型［3］。动物身体和精神的疲劳一定程度反映在动物行为和免疫状态上，根据慢性疲劳综合症和祖国医学对“疲劳”的治疗原则,本文拟通过观察动物行为和外周血淋巴细胞凋亡的改变, 从动物行为学和免疫学角度来探讨慢性疲劳综合症发生机制，并观察运动配合疏肝健脾中药和艾灸足三里对其调理作用。 　 　1 材料与仪器 　　1.1 实验对象由上海西普尔- 必凯实验动物有限公司提供SPF级健康雄性Sprague-Daine M HEPES；0.3%戊巴比妥250 ml；生理盐水。无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15 mol/L pH 7.2；NaCl 8.0 g KCl 0.2 g Na2HPO4 1.15 g KH2PO4 0.2 g；将上述试剂依次溶于1 000 ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10～15 min，存在4℃冰箱中备用。 　　 2 方法 　　2.1 动物分组称体质量后，将大鼠随机分为对照组(CG)、CFS模型组(CFSG)、运动加中药组(ETCMG)和艾灸组(MG)（组间无差异）。每组12只，标记后分笼饲养，每笼6只。 　　2.2 CFS造模方法对CFSG、ETCMG、MG三组实施造模。每天电击，用波宽2 ms的电脉冲，1 mA电流强度，时间隔20 s，每天15次电击，共5 min。束缚和冷水游泳隔日交替进行：将大鼠放进自制的行为束缚筒内，束缚2 h/次；冷水游泳，水温12℃，时间5 min，游泳后用电吹风机将大鼠吹干。 　　2.3 CFS干预方法 　 　　2.3.1 ETCMG组干预方法 　　中药干预：给予疏肝健脾的中药片剂，用温开水溶解，每天灌胃1 ml中药，剂量为按成人每公斤体质量 计算 剂量的20倍。为排除灌胃对试验的影响，其他各组均灌胃1 ml生理盐水。 　　运动干预：采用自制跑笼进行，跑笼安装计数器，运动组大鼠在直径40 cm的自制圆形跑笼中进行自主运动，每日跑200圈，总长度约251.2 m，每周7 d。跑动时间约20～90 min不等。试验第1周适应期内，通过训练大鼠，让其能自主跑动。训练的方式为将ETCMG大鼠放进转笼，让其主动跑笼，第1天跑10 min，以后每天增加10 min，直到递增至1 h/d，自动记录跑笼圈数。 　　2.3.2 MG组的艾灸方法MG组的艾灸方法：与造模束缚同时进行。把艾条分卷成直径6～8 mm的灸条，先将大鼠后肢腿部两侧穴位的毛剃净后放进行为束缚筒，用封箱胶带从大鼠尾部粘贴固定，露出两后肢，持艾条于“足三里”［4］穴上2～3 cm处悬灸,采用温和灸补法，1次/d，两穴15～20 min/次，直至皮肤发红发热为止。 　　2.4 旷场实验（open-field test）各组大鼠进行3次旷场实验，均采用DigBehv动物行为视频跟踪分析系统（上海吉量软件科技有限公司提供），测试在隔音、避光的开放场箱（60 cm×60 cm×65 cm）中进行。箱左侧面中心装有摄像头。在场箱底面长宽60 cm方形旷场内，中央有16个直径为2 cm的圆形小洞，深1 cm，小洞底为球形凹，安装有红外线计数装置，记录大鼠探洞行为次数。以距离旷场四边15 cm画四条线，即为“井”字，把旷场分为四边、四角，一中央，9个区。视频合成器将大鼠看成一个质点，记录大鼠运动轨迹，记录总路程(cm)、活动时间（s）、中央区路程（cm）、探洞次数。检测固定在19：00～22：00进行。记录时间为3 min，在放入大鼠后1 min开始计时。