拉曼光谱法鉴定水稻叶绿素缺乏突变体.pdfVIP

第25卷，第1期 光 谱 实 验 室 Vo1．2 5，No．1 2 0 0 8年 1月 Chinese Journal of Spectroscopy Imboratory January，2 0 0 8 拉曼光谱法鉴定水稻叶绿素缺乏突变体① 汪得凯② 裴克梅 刘合芹 (浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所 杭州市石桥路198号 310021) n(浙江理工大学先进纺织材料与制备技术教育部重点实验室 杭州市 310018) 摘 要 植物叶色变异是自然界普遍的现象，叶色突变体已广泛应用于基础研究和生产实践。利用拉 受光谱测定了水稻叶色黄化突变体叶片的叶绿紊含量。研究结果显示：在拉受光谱图中，叶绿紊的特征峰 (1155，1527cm )在突变体中强度较野生型有很大的下降，表明突变体中总的叶绿紊含量较低；紫外分光 光度计的测定结果表明该突变体的叶绿紊含量比野生型降低，且叶绿紊b的含量极低，证实了拉曼光谱所 反应的信息I拉受光谱法可以用来快速鉴定植物活体的叶绿紊含量。本研究尝试利用拉受光谱测定活体生 物的叶绿紊含量的可行性，为今后发展便携式、快速、准确、无损伤鉴定叶绿紊含量及其他生物质含量的方 法和开发相关仪器提供研究思路。 关键词 拉受光谱，紫外分光光度计，突变体，叶绿紊含量。 中图分类号：0657．37 文献标识码：A 文章编号：1004-8138(2008)01-05-0001 1 引言 拉曼光谱是一种基于非弹性光散射(即入射激光的能量／频率发生改变)的光谱[1 ]。拉曼光谱 与其他光谱相比有独特的优点：首先对于非极性基团如C--=C、C—C和S—S等红外吸收较弱的官 能团在拉曼光谱中可以得到吸收强烈的谱带；其次，水分子的拉曼光谱信号很弱可以较容易地得到 含水样品的拉曼光谱，因此拉曼光谱可被广泛地用于研究含水分的生物体系(诸如谷物及食品体系 等)中；再次，作为一种鉴别物质结构的分析测试手段拉曼光谱的另一大优点是不要求样品具有光 透性，可以很容易地得到浑浊样品的拉曼光谱。因此拉曼光谱具有快速、样品制备简单(很多样品无 需处理，可以进行无损伤鉴别)及精确等诸多优点。目前，拉曼光谱已广泛应用于有机、无机、高分 子、生物、环保、农业、医学等各个领域，成为重要的分析方法和手段之一[3叫]。 叶片是植物光合作用的重要器官，叶色变化在很大程度上反应了植物光合作用的强弱。叶色变 异是水稻中常见的突变性状，由于突变基因往往直接或间接影响叶绿素的合成和降解，导致叶绿素 含量发生变化，进而影响植株的光合效率，造成作物减产，严重时甚至导致植株死亡。近年来，叶色 突变体的利用价值受到越来越多关注[8叫 。目前叶绿素含量的测定主要通过目视比色法、原子吸 收光谱法、紫外分光光度计、荧光光谱法等。利用拉曼光谱来研究叶绿素的相关性质已经有所开展， 但是直接测定植物体内的叶绿素含量目前还未见报道[1 ‘’。本研究利用拉曼光谱结合紫外分光光 ①国家自然科学基金(Grant No，浙江省自然科学基金(Grant No．Y306149)资助项目 ②联系人．电话l(0571办)’传真l(0571E·mail~kay77@163．tom 作者简介。汪得凯(1977一)，男．安徽省舒城县人．博士，助理研究员．主要从事植物生物技术研究工作． 收稿日期l2007-10-17I接受日期~2007-10-31 F 光谱实验室 第 25卷 度法测定了水稻野生型和黄化突变体中叶绿素的含量，期望以该突变体为材料发展一个良好的实 验系统，建立无损伤快速鉴定植物体内叶绿素含量的实验方法，拓宽拉曼光谱在生物体系及农业生 物技术中的应用范围。 2 材料和方法 2．1 实验材料 本实验中所用的水稻(Oryza sativa I ．)品种为粳稻品种中花l1，叶色黄化突变体材料来自一 个遗传转化后代，突变体叶色从