植物细胞程序性死亡的检测方法及调控机制.pdfVIP

植物细胞程序性死亡的检测方法及调控机制 李 茜 (南京农业大学，国家生命科学与技术人才培养基地，南京210095) 摘 要：植物细胞程序性死亡(PCD)普遍存在于植物生长发育及环境相互作用过程中，是由基因调控的、主动 的细胞死亡过程。植物PCD已成为当前生物学研究的热点之一。就植物PCD的细胞形态学、分子生物学的 特征和检测方法以及植物PCD的酶和信号分子的调控进行了总结。 关键词：细胞程序性死亡：植物；PCD检测；PCD调控 植物细胞程序性死亡指植物细胞生长发育过程中， 缩小，核质浓缩聚集，形成凋亡小体等。但一般只能作细 由自身基因编码的、主动的、有序的细胞死亡进程，是生 胞PCD的推测，不具有诊断价值，因为在光镜下某些类 物体与环境及自身的新陈代谢过程中正常的生理反应【I】。 型的细胞坏死与细胞凋亡的形态相似。 大量研究已证明，在植物发育过程中PCD普遍存在，与 2．1，2电子显微镜 PCD细胞体积变小，细胞质浓缩。凋 细胞分裂一样是植物体正常发育必不可少的组成部分， 亡I期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴 也是植物体抵御病原体侵染、适应逆境胁迫的重要手段。 现象(cavitations)的空泡结构：II期细胞核的染色质高度 凝聚、边缘化、呈半月状；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为 碎块，产生凋亡小体。电镜超微结构的观察是诊断细胞 PCD的指标，尤其是凋亡小体的发现。但电镜只能定性 物学机理等方面进行研究，并获得一些重要发现。笔者结 而无法定量，而且观察到凋亡小体的机率也不高。 合最近的研究工作对植物PCD的基本特征、检测及调控 2．2用生理生化及分子生物学方法检测植物PCD 等问题进行了探讨。 2．2．1 DNA梯状条带(DNA Ladder)PCD时基因组DNA l植物PCD的形态学和分子生物学特征 可断裂成长度为 180~200bp倍数的梯状条带(DNA 1．1植物PCD的形态学特征 ladder)，这是一种专一的核酸内切酶作用于核小体间降 在形态上，近年来研究表明，植物与动物细胞PCD 解DNA的结果。DNA梯状条带的存在与否是区分PCD 有许多相似的特征，包括细胞形态和DAN降解变化等。 与坏死的标准之一。对于坏死细胞的DNA而言，基因组 典型的细胞程序性死亡的形态学变化过程是：早期细胞 DNA的降解随机发生，在电泳胶上只能检测到连续分布 体出现收缩，密度加大，细胞器完整但紧密压缩，核浓缩， 的DNA条带(smearing)。PEG6000诱导的小麦叶片【4】、羟 染色质分布于核膜边缘，随后由膜包围DNA片段而形成 自由基诱导的烟草细胞[51、细胞色素C诱导的胡萝卜和烟 凋亡小体。细胞核在细胞PCD过程中起核心作用，但在 草原生质体【司和乙烯诱导的胡萝卜原生质体发生PCD时 不同细胞PCD过程中，细胞核的形态学变化并不完全相 均检测到DNA梯状条带。但并非所有进行PCD的细胞 同，其原因可能是PCD细胞的状态不同以及所处的分化 都能产生DNA特异片段，有时基因组DNA可降解成 阶段不同所致。 50kb左右的片段【7】。但大多数情况下在PCD组织中不能 1．2植物PCD的分子生物学特征 检测到这种DNA特异条带是由于样品中PCD细胞的比 在生化上，PCD的细胞表现为核酸内切酶活性增 例较低。有些研究者应用Southern杂交检测DNA特异 加，使染色质降解，核DNA从核小体间降解断裂，产生带 片段，取得良好结果。 有3．_OH末端的、大小不同的寡聚核小体片段，其片段