ReporterAssayKit-β-gal-研究用-东洋纺上海.PDF

Reporter Assay Kit -β-gal- (Code No.: BAK-101) 使用说明书 研究用 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN 目 录 [ １] 前言 1 [２] 本试剂盒的组成 2 [３] 操作步骤 3 本试剂盒以外的必需品 3 标准assay方法 3 简便assay方法 4 关于阳性对照溶液 5 [ ４] 疑难解答 6 [ １] 前言 在基因表达过程中发挥重要作用的promotor和enhancer、以及与其相结合的 转录因子等其分析方法，向来以reporter assay应用最为广泛。Reporter Assay Kit - βgal- 采用了目前为止作为reporter基因广泛使用的β-半乳糖苷酶( β-gal)的试 剂盒。在β-gal reporter assay 中，通过使用由大肠杆菌LacZ基因编码的β -gal(pH7.3为最适合) ，与大多数动物细胞持有的内在性β-gal(pH5 以下为最适宜) 以最适宜pH不同而被有选择地测定活性。以往的β-gal reporter assay通过使用 ONPG 的显色反应来显示转录活性，但是因为敏感度不高，一般只局限于作为其 它reporter assay 的内部对照使用。本试剂盒通过使用近年来开发的化学发光底物 克服了显色反应的缺点，能够以较高的敏感度进行范围更加广泛的assay 。本试剂 盒具有以下特征： 使用高敏感度的化学发光底物，测定范围更为广泛(5位数以上) 。 通过在高pH值(pH ＞9)条件下进行assay，将内在性的β-gal活性(背景) 限 制在最小范围内。 试剂盒内含有细胞溶解缓冲液，所以不需要配制特殊的试剂。 （注１） 比较容易进行样品配制（细胞溶解操作） 。 添附的细胞溶液缓冲液也可以应用于其它的reporter assay(luciferase （注２） assay等) 。 （注１）使用本试剂盒的细胞溶解缓冲液，几乎在所有的连接细胞(包括MDCK细胞和人类 角化细胞等细胞膜比较坚硬的上皮细胞) 中不用进行冻结溶解和剧烈的搅拌便可以进行细胞 溶解和样品制备。但有时在浮游细胞和极少数的连接细胞的细胞溶解中需要进行冻结融解和 搅拌操作。使用通常的连接细胞时也能够通过这些操作提高若干敏感度。 （注２）使用本试剂盒的细胞溶解缓冲液进行luciferase assay，与使用其他诸多试剂盒添附 的细胞溶解缓冲液的情况相比较，从试剂混合到发光信号达到顶点所需要的时间变长。因此， 即使使用不具有分注功能的测定装置也能较容易的进行luciferase assay 。 1 东洋纺（上海）生物科技有限公司 参考文献 *J.Alam and J.L.Cook (1990) Analytical Biochemistry 188 245-254 *E.G.Beale, E.A.Deeb, R.S.Handley, H.Akhavan-Tafti and A.P.Schaap (1992) Biotechniques 12 320-323 *西乡 熏，佐野 弓子翻译 (1997) CURRENT PROTOCOLS简明版 分子生物学实验 Procotol Ⅱ 288-298 *D. C. Young, S. D. Kingsley, K. A. Ryan and F. J. Dutjo (1993) Analytical Biochemistry 215 24-30 [２] 本试剂盒的组成 ·化学发光试剂 (Lumi-Gal® 530): 100 ml ·细胞溶液缓冲液: