三合一咖啡包Caffeine分析应用例.DOC

Thermo Scientific Dionex Ultimate 3000 X2 Dual Analytical LC應用實例 對於血漿、尿液等生理檢品或是乳製品項含有蛋白分子，如果這些蛋白類蠻大分子未經適當“樣品處理”去除之，一旦被注入LC分析，該等蛋白類分子，會被Column材料吸附住，累積吸附將傷害Column。因此去除蛋白類等大分子物，是血漿、尿液、乳製食品項必要的Sample Preparation處理的工作。 一直以來，兩種column前後排列的Tandem LC分離方式，配屬一個十口閥( 10-Port Valve)，分別連結SPE處理用層析管( mini column )及主分離層析管(Analytical column) 一前一後，分別由兩個pump供輸移動相，一個移動相，先於SPE管排除蛋白類大分子物等，而分析物( Analytes )則暫時被保留於SPE管內，之後十口閥旋轉位置，由另一個移動相，用來反向回掃SPE管內的保留分析物，流向主分離層析管，經檢測器完成分析。 相關十口閥的流路示意圖，請參照附件圖一。 試以美國Thermo Scientific Dionex Ultimate 3000 X2 Dual HPLC自動化SPE-LC應用於“三合一咖啡”的caffeine分析。毋須另外沈澱蛋白處理，只要 ”三合一咖啡”經過0.45um薄膜過濾或高速9,000 rpm以上離心處理，即可直接注入X2 Dual HPLC分析，經mini column ( AV-2 Column ) 排除牛乳蛋白等大分子，保留住分析物Caffeine，憑藉十口閥旋轉應用，再以另一個移動相反向回掃AV-2保留之Caffeine，流向analytical column ( Inertsil 5 ODS-3 )完成分離檢測為例。 採用LC儀器設備:Management for System control including 10 port valve switching program and data acquisition with 3D presentation 操作條件: 10-Port Valve program Time (min) Position 0.00 10-1 1.05 1-2 3.00 10-1 *Mini Column: AV-2 4.6x50mm (排除蛋白等大分子) *Inertsil 5 ODS-3 4.6 x 150mm (主分管) Pump的Elution Program用於Inertsil 5 ODS-3分離Caffeine Flow (ml/min) Time (min) %A (H2O) %B (MeOH) 1.0 0 70 30 Lord Pump的Elution Program用於AV-2 4.6x50mm排出蛋白質等大分子 Flow (ml/min) Time (min) %A (H2O) %B (MeOH) 1.0 0.0 100 0 1.0 3.0 100 0 1.0 3.5 50 50 1.0 8.0 50 50 1.0 8.5 100 0 10-Port Valve作用說明 *憑藉一組十口閥(10-port valve)，於Port 6至Port 3連結一支Mini column ( AV-2 4.6x50mm ) 於閥位10 - 1配合Lord Pump備作排除蛋白等大分子，保留分析物Caffeine，繼之於1.05分閥位旋轉 2 -1位置，接受Analytical Pump 的移動相，將AV-2 Column中保留Caffeine反向回掃至主分析管Inertsil 5 ODS-3 4.6 x 150mm， 依Tandem LC模式完成分離檢測。請參考前圖一所示流路連結。 *試作準備: 先瞭解Caffeine分析物於AV-2層析管的滯留時間與流程 *十口閥於Valve 10 -1位置，Port 2得連上Detector作檢測至Waste。注入標準品Caffeine流經AV-2 Column分離檢測，用以確定Caffeine於AV-2的分析時間約為1.1分，如圖二之(1)所示。 *試作準備: 確立排除蛋白等大分子物所須的時間 *同上，注入已過濾”三合一咖啡包檢液”流經AV-2 Column分離檢測，再與圖二之(1)比較之，得悉1.05分之前為所須排除之“蛋白等大分子物”的時間設定，如圖二之(2)所示。 *試作準備: 反向回掃mini column, AV-2所保留之Caffeine至主分析管。確立分析物caffeine滯留時間 十口閥於10 -1位置Port 4接上Analytical Pump，Port 5接上Analytical c