抗环胍氨酸肽单链噬菌体抗体库的建立.pdfVIP

Q10 医学临床研究 2013年 1o月 第 3o卷 第 1O期 JClinRes,Oct．20羔’1l30，N — — · 论著 · 抗环胍氨酸肽单链噬菌体抗体库的建立 铁 宁 王勇 张桂枝 赵静 李鸿斌一 (内蒙古 医科大学附属 医院风湿免疫科，内蒙古 呼和浩特 010059) [摘要]【目的】拟构建并鉴定抗环胍氨酸肽 (cycliccitrutlinatedpeptide，CCP)单链片段 V(Singlechain FragmentV，ScFv)噬菌体抗体库 ，为进一步可溶性表达和检测类风湿性关节炎(RA)关节滑膜 的CCP表达情 况 ，揭示 CCP及其抗体在 RA发病 中作 用奠定基础 。 【方法】①分 离抗 CCP抗体 阳性患者外周血单个核 细 胞 ，提取 mRNA 并反 转录 cDNA。扩增 免疫球 蛋 白重链可 变区(VH)和 轻链 可变 区(VL)。通过 重叠聚合 酶 链反应 (PCR)用连接片段将 VH 和 V ／V 体外连接成单链抗体基 因；SfiI和 NotI酶切并与噬茵粒 PHEN2连接 ；将 pHEN2ScFv电转至感受态大肠杆 菌 TG1，建立抗 CCp-ScFv噬 茵体抗体库 ；②检测抗 CCP—ScFvpHEN2噬茵体 的库容 、插入效率 I【结果】抗 CCP—ScFv噬茵体抗体库库容 8．76×10 CFU cfu／ mL，插入频 率 83．3 ；插入 率 83．33 。所插入DNA片断约 1180bp。MSPI酶切指纹 图谱鉴 定也显示多样 性 。 【结论】所构建抗环胍氨酸肽单链噬茵体抗体库库容可满足进一步可溶性表达的要求 。 [关键词] 细菌噬菌体 ； 抗体 ； 肽类 ConstructionofSingle-chainFragm entV AntibodypHEN2PhagemidLibraryofAnti_。cyclicCit__ rullinated Peptide 丌 E Ning， WANG Yong， ZHANG Gui—zhi，etal (Department of Rheumatology，A{filiatedHospitalofInnerMongoliaMedicalUniversity，Hohhot010059，China -[Abstraet][Objective]Toconstructandidentifyofsingle—。chainfragmentVantibody(ScFv)pHEN2pha—_ gemidlibraryofanti—cycliccitrullinatedpeptides(CCP)，andtofurtherexplorethesolubleexpressionofCCP insynovium ofrheumatoidarthritis(RA)SOastoprovidethebasisforrevealingtheroleofCCPandantibody inthepathogenesisofRA．[Methods]Periphera1bloodmononuclearcellsinpatientswithanti—CCPantibody wereisolatedfortheextractionofmRNA andreversetranscriptionofcDNA．Immunoglobulinheavychainvar～ iableregion(VH)andlightchainvariableregion(VL)wereamplified．VH andVK／V werelinkedintoScFv genewithjunctionsegmentbyusingoverlappingPCR invitro．SfiI andNotI endonucleasewerelinkedto phagemidpHEN2whichwaselectricallytransformedtocompetenceEscherichiacoli．