桂花SCoT标记体系的建立及其在遗传多样性分析中的应用_袁王俊.pdfVIP

园艺学报，2015 ，42 (3) ：569 –575. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0575；http ：//www. ahs. ac. cn 569 桂花 SCoT 标记体系的建立及其在遗传多样性 分析中的应用 1,2 1 1 1 1 1,* 袁王俊 ，马寅峰 ，董美芳 ，韩远记 ，张维瑞 ，尚富德 1 2 （河南大学生命科学学院，河南开封 475004 ； 河南大学中药研究所，河南开封 475004 ） 摘 要：以‘籽银桂’桂花叶片DNA 为材料，以 2 × Es TaqMasterMix 预混液为基本体系，针对影 响 SCoT-PCR 反应的退火温度、模板 DNA 用量、引物浓度等因素进行优化，建立了适于桂花 SCoT 分子 标记的反应体系。12 μL 反应体系含有 30 ng 模板 DNA ，引物浓度为 0.4 μmol · L-1 ，不同的引物退火温度 分别为 48 、49.9 、54.3 或 56 ℃。利用该体系对 12 个桂花品种进行分析，扩增条带清晰，扩增产物在 150 ~ 2 200 bp 之间。12 条引物共扩增出 244 条带，其中多态性条带 238 条，多态性比率为 97.47% 。在相似系 数 0.57 水平处，‘九龙桂’形成第Ⅰ组，其余11 个品种形成第Ⅱ组。第Ⅱ组中‘柳叶桂’、‘香云’、‘早 籽黄’、‘大花金桂’、‘桂冠籽金桂’、‘鹅黄’、‘籽金桂’和‘醉云’8 个花色不完全相同的品种聚在一起； ‘金桂’、‘早银桂’和‘籽银桂’3 个不同花色的品种聚在一起，说明品种间的亲缘关系与花色不完全相 关，这与其它分子标记结果一致。 关键词：桂花；SCoT 分子标记；退火温度；遗传分析 中图分类号：S 685.13 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2015 ）03-0569-07 Establishment and Genetic Diversity Analysis of SCoT Molecular Marker System for Osmanthus fragrans 1,2 1 1 1 1 YUAN Wang-jun ，MA Yin-feng ，DONG Mei-fang ，HAN Yuan-ji ，ZHANG Wei-rui ，and SHANG Fu-de1,* 1 2 （College of Life Sciences，Henan University ，Kaifeng ，Henan 475004 ，China； Institute of Chinese Materia Medica ， Henan University ，Kaifeng ，Henan 475004 ，China ） Abstract ：In this study，based on the ‘Ziyingui ’DNA and 2 × Es TaqMasterMix ，the SCoT-PCR amplification system of Osmanthus fragrans was established by optimizing reaction annealing temperature ，the amount of template DNA ，primer concentration and other factors. This system contained