简单重复序列区间(ISSR)引物反应条件优化与筛选.pdfVIP

热带亚热带植物学报 2003，l10)：15—19 JourndofTropicalandSubtropicalBotany 简单重复序列区间 (ISSR)引物反应条件优化与筛选 余 艳 陈海山 葛学军水 (中国科学院华南植物研究所，广东广州 510650) 摘要：以豆科沙冬青 mmopiptanthusmongolicus)的基因组DNA制备 ISSR-PCR模板。通过对聚合酶链式反应(PER) 体系中模板DNA浓度、Mg2+浓度、dNTP的用量、Taq酶的含量以及退火温度梯度进行试验，探讨筛选出清晰、多态性 高、可重复性好的ISSR引物的PCR反应条件 。用 100个 ISSR引物进行了PCR扩增，筛选出效果较好的 l5个引物， 得到 121个位点，其中43个多态位点，多态位点比例为36％。 关键词：ISSR；引物筛选；沙冬青 中圈分类号：Q503 文献标识码：A 文章编号：lo05—3395(2003)01-0015—05 OptimizationofExperimentConditionsandPrimer Screening thISSRM arkers YUYan CHENHai—shan GEXue—jun’ (SouthChinaInstituteofBotany,theChineseAcademyofSciences，Guangzhou510650，China) Abstract：Ammopiptanthusmongolicus(Leguminosae)weresubjectedtoISSR(Inter-simplesequencerepeat)-PCR analysisinordertoinvestigatethegeneticdiversitywihtinnadamongpopulations．GenomicDNA ofA．mongol／cus wasextractedashteISSRtemplate，nadhteinfluencingfactorsofISSRwerestudiednadhteexperimentparameters wereoptimized．ByadjustingtemplateDNAconcentration,Mgconcnetration，dNTPnadTaqpolymerasecontents, nadannealingtempreature，htePCR ma plificationconditionswereoptimized．Theoptimalexperimnetconditions wereasfollow：20ulsystemcontaining20ng1．tl～template，l0mmol／LTris-HCl H9．0)，50mmol／LKCI， 0．1％TritonX 100，2．75mmol／LM gCI2，0．15mrnol／LdNTP，2％ formamide，200nmol／Lprimer,1．5U Taq polymerase．W池 aMJhtermalcycle，optimalma plificationprogram waslcycleof5minat94℃ ；35cyclesof 30Sat94~C，45Sat 46-56~(3，nad 1．5minat72℃ ；lcycleof7rainat72~C；30rainat4~C，usnigblockconrtol sytle．OnehundredISSRprimerswreeusedtoscreenhtesuiatbleprimersforasesssnightegneeticdivresiytofA． mongolicus． ofwhich15ISSRprimers、Vitl1highresolutionnadmultiplepolymorphicbnadswere screened．Th e toatl121ISSRbnads werema plified、^，itl115primres．nadproduced43polymorphicbnads ． Keywords：ISSR；Primre screening；Ammopiptanthusmongolicus