酿酒酵母海藻糖-6-磷酸合成酶基因克隆及植物表达载体的构建.pdfVIP

卷 期 微 生 物 学 报 ! %’(! 0( 年 月 #$$ # !#$%’()(*($,-$ )*+,-., #$$ + / !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 酿酒酵母海藻糖 磷酸合成酶基因克隆 !! 及植物表达载体的构建 陈红漫 祝令香 董志扬 （中国科学院微生物研究所 北京 ） $$$8$ 摘 要：从耐热性极强的酿酒酵母菌株 中分离纯化出总 和 ，以 9:#;!5 09 =09 9% 逆转录酶合成 ，采用保守引物，从该 中扩增克隆出 基因，对该基因的全序列 ?@09 ?@09 !# 分析表明，该基因含有 3$4个核苷酸，与国外报道相关基因的同源性达 22;5A。利用 和 切点将 基因插入植物表达载体 多克隆位点上，得到 基因 $%B! ’%(! !# DEF!18 !# C 植物表达载体重组质粒。 关键词：海藻糖 磷酸合成酶，基因克隆，表达载体 757 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） G1!! 9 $$$75#$2 #$$ $7$$3!7$3 海藻糖（ ）是一种非还原性二糖，它主要存在于一些生活在各种恶劣环境条 H,*I.’J* ［］ 件下的低等生物体内，如酵母、甲壳类昆虫及一些低等沙漠植物等 。这些生物之所以 能低抗高温干旱、冷冻及化学污染等逆境，主要是由于其体内海藻糖能有效地保护这些生 ［］ # 物的细胞在各种逆境下的生物活性 。研究表明，海藻糖对高等动植物细胞同样具有较 好的保护作用。而高等植物不产海藻糖，如果能将海藻糖合成酶的基因转入高等植物，使 高等植物也具有合成海藻糖的能力，从而提高高等植物的抗逆特性，这对我国的农业生产 将具有重要的意义。酿酒酵母是海藻糖产量最大的微生物之一，酿酒酵母海藻糖的生物 合成是由海藻糖合成酶（ ）以 葡萄糖为底物催化而成。其中海藻糖 磷酸合 HK: L@K7 757 ［］ 1 成酶是关键酶 。 本文报道从海藻糖高产酿酒酵母菌中，利用 法