实验6萘、联苯、菲的高效液相色谱分析.docVIP

实验六 萘、联苯、菲的高效液相色谱分析 一、目的要求： (1)了解反相色谱的优点和应用 （2）掌握归一化定量方法 2．原理 在液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相（ODS），极性流动相，这种色谱法称为反相色谱法。这种分离方式特别适合于同系物，苯并系物等。萘、联苯、菲在ODS柱上的作用力大小不等，它们的值不等（为不同组分的分配比），在柱内的移动速率不同，因而先后流出柱子。根据组分峰面积大小测定的定量校正因子，就可由归一化定量方法求出各组分的含量，归一化定量公式为： ? ? ? ? 式中，为组分的峰面积，为组分的相对定量校正因子。采用归一化法的条件是：样品中所有组分都要流出色谱柱，并能给出信号。此法简便、准确，对进样量的要求不十分严格。 3．仪器与试剂 仪器：Shimadzu LC-10A高效液相色谱仪；紫外吸收检测器（254nm）；柱Econo-sphore C18(3μm)；10cm×4.5mm微量注射器。 试剂：甲醇（AR）；重蒸馏一次；二次蒸馏水；萘；联苯；菲均为AR级。流动相：甲醇/水=88/12。 4．实验步骤 （1）按操作说明书使色谱仪运行正常，并将实验条件调节如下： 柱温：室温 流动相流量：1.0mL/min 检测器工作波长：254nm （2）标准溶液配制：准确称取萘约0.08g，联苯0.02g，菲0.01g，用重蒸馏的甲醇溶解，并转移至50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。 （3）在基线平直后，注入标准溶液3.0μL，记下各组分保留时间，再分别注入纯样对照。 （4）注入样品3.0μL，记下保留时间，重复两次。 （5）实验结束后，按要求关好仪器。 5．结果处理 （1）确定未知样中各组分的出峰次序。 （2）求取各组分的相对定量校正因子。 （3）求取样品中各组分的百分含量。 （4）计算以萘为标准时的柱效。 6．注意事项 室温较低时，为加速萘的溶解，可用红外灯稍稍加热。 7．思考题 （1）观察分离所得的色谱图，解释不同组分之间分离差别的原因。 （2）高效液相色谱柱一般可在室温下进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱有时也可以恒温，这又为什么？ （3）说明紫外吸收检测器的工作原理。 ? ? ?