清肌瘤胶囊质量标准探究.doc

清肌瘤胶囊质量标准探究关键词 清肌瘤胶囊 质量标准 三七 莪术 清肌瘤胶囊是由蜈蚣、三七、莪术、皂角刺等多味中药组成的复方中药制剂，具有活血破瘀，祛瘀通络，消积化症之功效；用于瘀痰互结胞宫所致的：子宫肌瘤、月经延期、经量较少、小腹疼痛等症。为更好地控制制剂质量，保证疗效，本研究采用TLC法对三七、莪术进行定性鉴别，采用HPLC法测定三七中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量，为清肌瘤胶囊提供定性和定量的质量控制方法。 1 仪器与试药 1.1 仪器： Varian Prostar高效液相色谱仪，包括330二极管阵列检测器，230三元泵，410自动进样器，Varian色谱工作站；Sartorious BP211D型1/100000电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；KQ-500DE型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。 1.2 试药： 三七皂苷R1对照品(批号：110745-200516)、人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-200726)、人参皂苷Rb1对照品(批号：110704-200318)及莪术对照药材均购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯(Merck公司)，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。清肌瘤胶囊与阴性对照均由本院制剂室提供。 2 方法与结果 2.1 TLC鉴别： 分述如下。 2.1.1 三七的鉴别：取本品内容物1g，加甲醇15mL，加热回流提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用乙醚提取2次，每次20mL，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。取缺三七的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂[1]，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。图略。 2.1.2 莪术的鉴别：取本品内容物2g，研细，加石油醚(30~60℃)20mL浸渍4h，过滤，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液。另取莪术对照药材1g，同法制成对照药材溶液。取缺莪术的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30~60℃)-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂[1]，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。图略。 2.2 含量测定： 分述如下。 2.2.1 色谱条件：色谱柱：YMC-Pack ODS-A (250 mm×4.6mm，5μm)；流动相：A：乙腈，B：水，按表1进行洗脱[2-5]；柱温：30℃，流速：1.0 mL/min，检测波长为203nm。 2.2.2 溶液的制备：分述如下。 2.2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R1 0.575mg、人参皂苷Rg1 0.980mg、人参皂苷Rb1 0.850mg的混合溶液，即得。 2.2.2.2 供试品及阴性样品溶液的制备：取本品及阴性样品各约0.5 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇20 mL，超声处理30分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。 2.2.3 系统适用性试验：精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件记录色谱图，见图1，结果按三七皂苷R1峰计算，理论塔板数大于4000，供试品色谱图中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1与各自相邻峰的分离度均大于1.5，且阴性样品溶液在与对照品出峰相应的保留时间处无色谱峰出现，阴性样品无干扰。表明本法专属性强。 2.2.4 方法学考察：分述如下。 2.2.4.1 线性关系考察：精密吸取上述对照品溶液(每1mL含三七皂苷R1 0.575mg、人参皂苷Rg1 0.980mg、人参皂苷Rb1 0.850mg混合溶液)1，2，4，6，8，10 mL加流动相稀释至25mL，精密吸取10μL注入高效液相色谱仪