湿热证大鼠模型研制及评价.docVIP

湿热证大鼠模型研制及评价摘要：目的：本模型以中医基础理论为依据，采用多因素复合遣模方法，通过观察模型大鼠的免疫、代谢的变化。对湿热证模型进行评价。方法：分别运用放免法观察SIgA、IL-1、TINF-a，GAS、MTL；直接法测定HDL-c、LDL-c；定磷法测肝线粒体Na+-K+-ATPase活性。结果：模型组大鼠的症状、体征变化，与中医学湿熟证基本相符；模型组SIgA、TiNF-a、IL-1β水平显著升高，HDL-c、LDL-c水平非常显著增高，模型组MTL水平显著升高，GAS水平显著降低，模型组肝线粒体Na+-K+-ATPase活性非常显著降低，说明湿热证大鼠模型制作成功。 关键词：湿热证；模型；研制 中图分类号：R-33 文献标识码：A 　文章编号：1673-7717(2007)12-2549-03 湿热既是中医特有的致病原因，又是具有广泛临床基础的中医病证，涉及多系统、多器官、多组织的病变，包括外感和内伤病证。温病湿热证的发病正如薛生白在《湿热病篇》中言：“太阴内伤，湿饮停聚，客邪再至，内外相引，故病湿热”。本模型以中医传统理论为依据，采用多因素复合造模方法，观察生物因素、高脂、高温高湿作用于大鼠形成温病湿热证的宏观病态及免疫、代谢功能等综合微观指标变化，并通过相关治法方药进行反证，以明确湿热证的特质基础及客观指标。 1.实验材料 1.1实验动物 清洁级wistar大鼠，雌雄各半，体重(200±10)g。由湖北省医学实验动物中心提供。 1.2药物及试剂 大肠杆菌：菌种号：AB94013。武汉大学微生物保藏中心提供。湖北中医学院微生物室复壮、培养，应用浓度为109/mL,4℃冰箱保存。高脂饲料：胆固醇、胆酸钠，武汉亚法生物技术有限公司提供。配方：普通饲料+胆固醇25g/kg+胆酸钠2g/kg+蛋黄粉80g/kg+猪脂100g/kg。SIgA、TNF-a、IL-1β；胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)放免试剂盒解放军总医院科技开发中心放免研究所提供。ATP酶测试盒：南京建成生物工程研究所提供。 2.实验方法 2.1动物分组 常规喂养3天，随机将24只大鼠分为：正常组、湿热模型组(高脂+高温高湿+大肠杆菌)、模型对照组(普食+高温高湿+大肠杆菌)。 2.2造模方法及过程 正常组：在正常温湿度(温度24～28℃，相对湿度60％～75％)环境下，普通混合饲料喂养29天。湿热模型组：在正常温湿度环境下，高脂饲料喂养2周后，再放人人工气候箱中(温度35℃，相对湿度95％)，每天造模时间(上午8～12时，下午13～17时)，高脂饲料喂养12天后，灌服大肠杆菌109/(mL200g)(预实验摸索剂量)。4h后，再加强灌服1次，继续放人人工气候箱造模观察3天。模型对照组：过程同湿热模型组，整个过程普食喂养。 2.3检测方法 SIgA、TNF-A、IL-1β，GAS、MTL采用放免法；肝线粒体K+-Na+-ATP酶活性测定采用定磷法。具体操作均按说明书进行。HDL-c、LDL-c为直接法(TBA120FR，东芝，湖北省中医院生化检验科)。 2.4统计学方法 用SPSS13.0统计软件统计处理，数据均以均数加减标准差表示，采用单因素方差分析，组间用q检验。P0.05为有显著性差异。P(0.01为有非常显著性差异。 3.实验结果 3.1症状体征 正常组动物：在喂养4周期间，指征均无明显变化。湿热模型组：在灌服大肠杆菌前，大鼠饮水量、饮食量已有所减少，少数大便较软，存在少许粘液，尿黄浊。灌服大肠杆菌后，全部大鼠体温升高，3天后仍不退。上述症状加重，大便次数增多，有些呈稀烂状。全部大鼠蜷卧懒动，耸毛明显，毛色暗黄无泽，与正常组比较普遍消瘦。模型对照组：体温同湿热模型组，维持时间稍短，饮水、饮食量较正常组少，大便有些变软。余与湿热模型组相同。 3.2各组大鼠血清SIgA TNF-a IL-1β水平比较 见表1。实验结果显示：模型组、对照组血清SIgA水平显著升高，与正常组比较均有显著性差异；模型组与对照组比较无显著性差异；模型组、对照组血清TNF-a水平显著升高，与正常组比较均有显著性差异，模型组与对照组比较无显著性差异；模型组、对照组血清IL-1β水平非常显著升高，与正常组比较均有非常显著性差异；模型组与对照组比较无显著性差异。 3.3各组大鼠血中MTLGAS水平比较 见表2。实验结果显示：模型组血浆MTL显著升高，与正常组比较有非常显著性差异。对照组升高与正常组比较无显著性差异。模型组血清GAS显著降低与正常组比较有非常显著性差异。对照组也降低，与正常组比较无显著性差异。 3.4各组大鼠血浆HDL