灵芝总三萜纯化工艺探究.doc

灵芝总三萜纯化工艺探究摘要： 采用大孔树脂纯化方法优选出纯化灵芝中总三萜的工艺。方法：D101大孔吸附树脂进行纯化，用醇-水梯度洗脱。灵芝样品浓缩液100 mL(0.5 s/mL)上大孔树脂柱(D15 mm×H120 mm，干重50g)，用蒸馏水1000 mL、60%乙醇 800mL、90%乙醇500mL依次洗脱，灵芝总三萜酸富集于90%乙醇洗脱液部分，且除杂质能力强.通过大孔树脂富集与纯化后的灵芝总三萜洗脱率达90.6%，90%乙醇洗脱液干燥后总固物中灵芝总三萜纯度可达20.3%。为此，采用此法可较好地纯化灵芝总三萜。 关键词： 灵芝； 总三萜； 纯化 中图分类号： TQ28 文献标识码： A 文章编号： 1009-8631（2012）04-0119-02 1 概述 灵芝是重要药用材料之一，在我国具有巨大的知名度，灵芝属于真菌界、伞菌亚门、担子菌门、伞菌纲、多孔菌目、灵芝科、灵芝属[1]。灵芝多长于森林中，如腐朽的树桩等。明代药学家李时珍的《本草纲目》对灵芝的种类、颜色、气味、功效等做了比较详细的描述。在我国，主要分布于四川、贵州、山西、江苏、浙江、云南、山东、江西、广西、福建、台湾、湖南、安徽、海南、吉林以及河北等地[2]。2000版的《中华人民共和国药典》把灵芝列为药用菌[3]。灵芝的药理活性及功效己被广大人们所认可。20世纪50年代以来，随着人工培育灵芝的成功以及日后发展起来的发酵培养灵芝菌丝体的技术，灵芝的开发应用已经趋于大众化。市场上以灵芝为原产品也越来越多。 2 灵芝化学成分和生物活性 各种文献及实验研究证明灵芝具有多种药理作用，如:抗肿瘤、调节免疫功能、保肝、降血糖、降血压等等[4]。灵芝中所含的化学成分比较复杂，到目前为止，己经在灵芝中分离出了近200种化合物，分为多糖类化合物、三萜类化合物、核营类、吠喃衍生物、生物碱类、氨基酸多肤类、当醇类等十大类，而在灵芝中最主要的化学成分是多糖类化合物及三萜类化合物[5]，是最主要的功效成份，因此一直也是研究的重点。 3 灵芝三萜的提取、纯化和分离研究概况 3.1三萜类化合物的提取方法 灵芝中三萜类成分的分离及分析检测的方法很多，但各有其使用范围。选择最合适的提取分离及分析测定方法，除了要考虑分析的三萜类成分的结构性质外，还要考虑别的成分对它的干扰。因此，在实验室实际应用中应根据具体情况进行具体分析，确定最佳的提取分离及分析测定方法。灵芝三萜的提取方法有很多，例如有机溶剂提取法，超声波提取，临界流体萃取(SFE)等，其中最常用的是有机溶剂提取法。因为灵芝三萜是脂溶性的物质，而且其结构中含有羟基，使得此类物质具有一定程度的极性，根据相似相溶的原理及来源广泛和价廉等特点，本文选用乙醇作为提取溶剂，可用常规的回流提取进行。 3.2三萜类化合物的分离纯化方法 灵芝三萜化合物，文献报道大多是经过反复硅胶柱层析分离，较纯的部分再用薄层层析、低压柱层析、制备高效液相色谱等进行分离纯化[6]。 3.2.1吸附色谱法 硅胶柱色谱法是比较常用的三萜类化合物分离纯化方法，各种方法中洗脱液互有差异。黄伟光[7]等用氯仿-甲醇脱洗，配比为98:2，获得无定形苦味灵芝酸A；用95:5配比获得无定形微苦灵芝酸B。 3.2.2高效液相色谱法(HPLC) HPLC检测三萜类化合物，具有快速、简便、灵敏的特点，已经得到广泛应用。邢增涛等用HPLC对同一灵芝株不同生长阶段及不同品种灵芝子进行研究，证实HPLC分离三萜类物质的良好表现[8]。 3.2.3大孔吸附树脂 大孔吸附树脂是新型的一项技术。大孔树脂通过表面吸附、表面电性或形成氢键等达到目的[9，10]。具有有机溶剂少，选择性好，吸附容量大，再生处理方便等优点。本文采用此纯化方法。 4 试药与仪器 4.1试药。灵芝药材（国琼紫灵芝）；D101大孔树脂（上海开平树脂有限公司）；齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）；硅胶G；以下试剂均为分析纯：乙醇、甲醇、氯仿、石油醚、甲酸乙酯、甲酸。 4.2 实验仪器。旋转蒸发仪（N-1000，日本）；GB204电子天平（瑞典）；751型紫外—可见分光光度计（上海分析仪器厂）；树脂柱（杭州三特医药化工设备有限公司）等。 5 方法与结果 5.1灵芝三萜的提取。灵芝子实体，切片后烘燥、打粉。每次称取300克灵芝子实体粗粉置于2500ml的圆底烧瓶中，以95%乙醇作为提取溶剂，料液比为1:5、浸提温度为80度左右、浸提时间为1.5h，回流提取3次，待冷却后过滤，合并滤液，减压浓缩，可得浓缩液。 5.2 灵芝三萜的纯化。将新大孔树脂于95%乙醇溶液中浸洗24h后，用蒸馏水清洗至无醇味，再用5%盐酸浸泡24 h，用蒸馏水洗至pH值中性后，