甲型H1N1流感住院发热病人咽拭子病毒核酸测定排查诊断.doc

甲型H1N1流感住院发热病人咽拭子病毒核酸测定排查诊断[摘要]目的探讨甲型H1N1流感诊断方法，以做好防控和临床救治。方法 对2009年8月至2010年2月马鞍山市传染病医院收治的111例甲型H1N1流感流行期间患者咽拭子RT-PCR病毒核酸测定诊断情况进行回顾性分析并总结。结果111例发热病人，RT-PCR病毒核酸测定确诊病例83例（阳性74.78%），临床诊断及疑似病例28例（阴性25.22%）。 [关键词]甲型H1N1流感； 发热病人； RT-PCR病毒核酸； 检测 [中图分类号] R511.6[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515（2010）-11-287-02 本文对马鞍山市传染病医院收治住院的111例甲型H1N1流感流行期间所有发热病人咽拭子RT-PCR病毒核酸测定并对阳性患者治疗后再次复查，共采集上呼吸道标本124份，进行回顾性分析报告如下。 呼吸科共收治甲型H1N1流感流行期间住院的111例发热病人，RT-PCR病毒核酸测定确诊病例83例（阳性率74.78%），临床诊断及疑似病例28例（阴性率25.22%）。阳性病人治疗时间5～9天，平均6～7天后再次复查，咽拭子甲型H1N1病毒核酸检测均阴性，所有病例体温正常，流感样症状消失，临床症状稳定。初步判断甲型H1N1流感治疗后RT-PCR病毒核酸最长转阴时间5～9天。测定结果与临床症状基本相符。 1 临床标本的采集 （由马鞍山市传染病医院呼吸科临床医师完成） 1.1采集对象所有收治住院甲型流感（ H1N1）流行期间发热病人、疑似病人、确诊病例治疗后病人，均采集上呼吸道标本来检测进行RT-PCR甲型H1N1病毒的相关检测。共采集上呼吸道标本124份（包括复查）送检（由马鞍山市传染病医院呼吸科临床医师完成）。 1.2采集种类鼻咽拭子或者鼻腔冲洗液。口腔含漱液、鼻咽或气管抽取物、痰、气管插管的病人也可收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液（ VTM ）中，密封，置于特制箱，周围用冰块或冰排保存，立即运送至马鞍山市疾病控制中心实验室进行检测。 1.3采样器材要求 1.3.1拭子应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做杆，不推荐棉拭子和木杆，不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液。 1.3.2采样管外螺旋口、耐－70℃冻存的标准管 1.3.3采样液含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液（可使用Hank’s或Eagle’s等培养液加入抗菌素和0.5%BSA） 1.3.4临床标本储存所有呼吸道标本应保存在-70℃度冰箱中，如果没有，应保存在4℃冰箱，但不应超过4天。 1.3.5临床标本运输应按照A类包装标准进行样品的包装，所有标本应标示清楚。病例标本运送应包含病例的详细信息。 1.3.6标本运送方式省内运送：公路运输，专人（由马鞍山市传染病医院呼吸科临床医师完成），专车（由马鞍山市传染病医院120完成）。 2临床标本检测 （由马鞍山市疾病控制中心实验室完成） 2.1流感快诊检测以区别甲、乙型流感病毒，如乙型流感阳性可排除甲型H1N1流感，全部阴性结果则不能排除甲型H1N1流感。 2.2RT-PCR检测针对甲型流感病毒的特异性引物，有效地诊断病毒感染；甲型流感病毒（H1N1）PCR引物 SW Inf A:目标片段大小164 bp 5`-GCA CGG TCA GCA CTT ATY CTR AG-3` 5`-GTG RGC TGG GTT TTC ATT TGG TC-3` SW H1:目标片段大小115 bp 5`-GTG CTA TAA ACA CCA GCC TYC CA-3` 5`-CGG GAT ATT CCT TAA TCC TGT RGC-3` 检测实验室生物安全防护要求； 采集疑似感染甲型H1N1病毒病毒的患者临床标本、进行标本处理、包装、诊断性检测的工作人员必须进行严格的安全防护。 所有的涉及病例标本的实验操作（包括样本的处理、包装及包装拆除）必须在生物安全柜内进行，呼吸防护装备，检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备，鞋套，前封式手术服，双层手套，眼部防护装备（护目镜或面罩）。 3结果 疑似病例或临床诊断病例（28例）：RT-PCR病毒核酸测阴性，符合下列情况之一：⑴.密切接触者发病前7天内接触传染期甲型H1N1流感病例，并出现流感样临床表现的。密切接触者是指在未采取有效防护情况下接触传染期甲型H1N1流感病例的人群，具体包括：诊断、治疗或护理、探视甲型H1N1流感病例的人员；与病人共同生活、工作的人员；接触过病人的