糖肾Ⅰ号对早期糖尿病肾病大鼠干预及对P27表达影响.docVIP

糖肾Ⅰ号对早期糖尿病肾病大鼠干预及对P27表达影响摘要 目的:观察糖肾Ⅰ号方对早期糖尿病肾病大鼠的干预作用及对周期蛋白P27表达的影响,分析其可能的作用机制。方法:通过单侧肾切除合并注射链脲佐菌素(STZ)建立早期糖尿病肾病大鼠模型,随机分为假手术组(SO)、模型对照组(M)、糖肾Ⅰ号组(TS)、洛汀新组(B)、糖洛合组(TS+B),共5组,各10只。模型成功后给予不同的干预,共8周,末次给药12小时后,采集尿液、血液标本检测,组织行免疫组化检测,观察各组大鼠的肾重、肾脏肥大指数、肌酐,尿素氮等生化指标及P27蛋白表达的变化。结果:与模型组比较,糖肾Ⅰ号治疗组肾重、肾脏肥大指数明显下降,血清Scr、BUN显著降低,P27表达明显下调(P对照组的50%作为DN大鼠成模标准。 2.2 分组及给药方法:成模后随机分为:模型对照组(M)、糖肾Ⅰ号组(TS)、洛汀新组(B)、糖肾Ⅰ号+盐酸贝那普利治疗组(TS+B)加假手术组(SO)共5组,每组10只。大鼠给药剂量按照人与动物体表面积法[4]换算。大鼠药量#8226;kg??-1?#8226;d??-1?等于成人量#8226;kg??-1?#8226;d??-1?的6.25倍。糖肾Ⅰ号组:以相当于生药27.08g??-1?#8226;kg??-1?#8226;d??-1?液体量,每日灌胃1次;洛汀新组:研细末,以相当于干药18.75mg#8226;kg??-1?#8226;d??-1?粉末,溶于蒸镏水中,每日灌胃1次;假手术组及模型对照组:给予等量生理盐水。连续给药共8周。实验期间动物自由进食、饮水,不使用胰岛素及其他降糖药物。 2.3 观测指标及方法:分述如下。 2.3.1 尿微量白蛋白和β?2-微球蛋白测定:代谢笼中收集24h尿液标本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测。 2.3.2 肾重及肾指数:麻醉后,无菌操作取右肾,去掉被膜,滤纸吸干血迹后称重,并且计算肾指数(肾重/体重)。 2.3.3 肾功能:酶法及苦味酸法测定Scr、BUN。 2.3.4 免疫组化法检测P27:右侧肾脏,沿矢状正中线切开,取1/2肾脏中一小块皮质置入4%多聚甲醛固定液中,以备组织行免疫组化染色观察。免疫组化操作方法:右蜡切片常规脱蜡至水;0.1mol/L枸橼酸缓冲液高压锅抗原修复;3%H?2O?2室温封闭20min,蒸馏水冲洗;PBS洗,滴加封闭液,37℃20min;滴加1∶100稀释的兔抗大鼠多克隆P27抗体(武汉博士德生物工程有限公司产品)单抗4℃过夜;PBS洗,滴加非生物素标记的二抗,37℃30min;PBS洗,PBS洗,DAB显色;苏木素复染;常规酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。PBS代替一抗作阴性对照。 2.4 统计学处理:数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS13.0统计软件进行统计分析。多个样本均数的比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),两两比较采用最小显著差法(LSD)。检验水准设为α=0.05,P0.05)。见表1 表1 各组大鼠β?2-MG、UAlb的比较(x±s) 组别例数(只)β?2-MG(ug/24h)UAlb(ug/24h) SO组10119.24±66.363.99±2.30 M组10728.56±146.619.71±2.69 TS组10546.55±179.205.69±3.01 B组10534.59±147.705.63±2.05 TS+B组10442.41±124.745.62±4.03 注:SO为假手术组,M为模型对照组,TS为糖肾Ⅰ号组,B为洛汀新组,TS+B为糖洛合组,下同。 3.2 各组大鼠右肾重、肾重指数(肾重/体重)的情况:与假手术组比较,模型对照组和治疗组肾重、肾脏肥大指数均显著增高(P0.05)。见表2。 表2 各组大鼠肾重、肾脏肥大指数的比较(x±s) 组别例数(只)肾重(g)肾脏肥大指数(×10??-3?) SO组101.50±0.132.93±0.35 M组102.69±0.169.96±1.54 TS组102.63±0.267.67±0.92 B组102.52±0.347.91±1.71 TS+B组102.42±0.216.88±0.82 3.3 各组大鼠BUN、Scr的情况:与假手术组比较,模型对照组和治疗组Scr、BUN均显著增高(P0.05);各治疗组间比较,Scr、BUN差异无统计学意义(P0.05)。见表3。 表3 各组大鼠Scr、BUN的比较(x±s) 组别例数(只)Scr(umol/l)BUN(mmol/l) S