酸性矿排水中微生物遗传多态性探究.docVIP

酸性矿排水中微生物遗传多态性探究氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans,T.f)是一种革兰氏阴性菌,具有化能自养、好气、嗜酸、适于中温环境等特性,广泛存在于酸性矿山水及含铁或硫的酸性环境中。 1氧化亚铁硫杆菌的生理特性 氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans):是生物湿法冶金过程主要的浸矿菌种。这种菌系短杆菌,很小,0.3～0.5×1.0-2.0um,圆钝末端,以单个、双个或几个成短链状存在。是一种化能自养菌,专性好氧,嗜酸性,广泛生活在金属硫化矿和煤矿的酸性矿坑水中。最适生长温度25℃～30℃。生长在pH1.4～6.0之间,最适pH2.0～2.5。T.f以氧化亚铁、元素硫以及还原态的硫化合物等来获得生命过程所需的能量,以空气中的二氧化碳为碳源,以氨或铵盐为氮源。有鞭毛,能快速游动,革兰氏染色阴性。在9K固体培养基上呈红棕色菌落,近杆形[5]。 2氧化亚铁硫杆菌的氧化机理 自20世纪60年代以来,因为它们具有特殊的生物学功能,吸引了许多学者对T.f和T.t的生理特性进行了研究。许多研究表明,T.t利用单质硫的能力比T.f强,但T.t不能利用硫酸亚铁。Wong和Henry对氧化硫酸亚铁的机理进行了详细的研究,指出能将亚铁氧化成三价铁,三价铁会与硫酸根离子发生反应产生铁矾沉淀,同时产生硫酸而引起pH的下降: 4FeSO4+02+2H2SO4→2Fe2(SO4)3+2H2O (1) 6Fe3++4SO42-+12H2O→2HFe3(SO4)2(OH)6 +10H+(2) Templellvl和Leathen等人研究发现氧化亚铁硫杆菌能将矿物中的硫化矿物氧化为硫酸和硫酸盐。Bryne等对T.f氧化硫化矿物的机制进行了详细的研究。并提出了一些常见矿物的主要反应机理,如黄铁矿和黄铜矿: 2FeS2+702+2H20→2FeSO4+2H2SO4 (3) 4FeSO4+02+2H2SO4→2Fe2(SO4)3+2H20 (4) CuFeS2+402→CuS04+FeSO4 (5) 2Cu2S+02+2H2 SO4→2CuS+2CuSO4+2H20 (6) CuS+202→CuS04(7) 3微生物分子生态学研究的一般方法和原理 微生物分子生态学是分子生态学的重要组成部分,是分子生物学、微生物生态学、微生物生理学与遗传学相互结合而产生的一门边缘学科。从目前的发展状况来看,当前的主要研究领域有:采用分子生物学技术研究不同自然环境中微生物的种类组成和群落结构以及它们的数量动态；环境因子对微生物基因表达的影响:自然条件下微生物之间遗传物质的转移:微生物与高等生物相互作用的分子机制,包括共生关系的建立、病原微生物的致病机制等。因此,微生物分子生态学是利用现代分子生物学的基础理论与技术,在分子水平上,研究微生物与其生态环境间相互关系的一门新兴学科。 3.1 一般研究方法 (1)平板涂布分离。 (2)显微镜观察:普通光镜、相差显微镜、透射电镜、扫描电镜。 (3)MPN法,即最大或然值计数法,是平板涂布分离法的一种,但由于广泛应用,被单独作为微生物研究的一种技术。 (4)活菌计数法,常见的用哑咙橙染色,活菌死菌颜色不一样。 3.2 分子研究方法 (1)纯种分离,G+C测定、16SrDNA, ISR测序、比对。 (2)变性梯度凝胶电泳(DGGE),通用引物PCR扩增同样长度的基因,常为16S的一段(300bp～400bp),割胶纯化、克隆测序,比对变性梯度凝胶电泳((DGGE)技术以土壤微生物群体的基因组DNA为研究对象,通过比较不同土壤中各种微生物的16SrRNA基因信息来了解微生物的多样性。 (3)FISH荧光原位杂交,设计不同荧光染料标记的特异探针,检测不同分类界元水平的细菌,可在细胞水平或者核酸水平与目标菌种杂交,在表面荧光显微镜或者CLSM(共聚焦激光扫描显微镜)下监测。 (4)TRFLP,末端限制性长度多态性。 (5)ARDREA.RISA。 (6)流式细胞仪计数。 (7)Real-time实时荧光定量PCR监测技术。 (8)克隆转化法:通用引物扩增从水样、土样中提取得总DNA,获得全长的16S rDNA序列,随机克隆入载体,转化到大肠杆菌,挑取阳性菌落,用不同的限制酶酶切检测不同的克隆,测序、比对。 (9)DNA芯片技术,主要用来研究微生物的功能基因组学。 4本论文的立论依据 AMD的pH通常很低,严重的地方可达pH2.0,富含SO42-离子和Fe3+离子,易浸出废矿石中的有毒元素