食源性致病菌快速分子学检测方法探析.docVIP

食源性致病菌快速分子学检测方法探析随着国内居民生活水平的整体提高，食品的质量和安全问题也成了消费者和生产企业共同关注的焦点，除了化学添加剂外，致病性微生物也是导致重大食品安全问题的风险因素。 致病性微生物(主要是食源性致病菌)检测是食品安全实验室检测中的重要环节，对相关检测技术的探讨也是食品微生物实验室工作人员关注的内容。目前比较常见的食源性致病菌主要包括肠道沙门氏菌(Salmonella enterlca)、单核增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、出血性大肠埃希氏菌0157(Escherichia coli0157：H7)、阪崎肠杆菌(Ente robactersakazakii)和金黄色葡萄球菌(StaphylOCOCCUS aureus)。 对于食源性致病菌检测，目前常见的方法有GB4789规定的传统平板检测法、免疫学检测方法及现代分子生物学检测方法等。结合这些检测方法，国内外不断涌现出各种新型食源性致病菌检测产品，这些新型检测产品都具有快速、准确及自?化的特点，其中分子生物学方法是目前研究的热点。 本文主要就目前国内市场上常见的分子生物学致病菌快速检测方法结合国外研究数据开展探讨，希望为广大食品微生物检测人员提供参考。 市场上常见的分子生物学致病菌检测平台主要有美国杜邦的BAX系统、BioControl公司的GDS一基因检测系统、Bio-Rad的IQ check检测系统及ABI公司结合其硬件平台推出的检测系统等。目前所列的检测系统都已进入我们国家并开始在一些大中型食品微生物检测实验室中得到应用。 1、BAX系统及其检测方法 杜邦所收购的Qualicon(快力康)公司最早推出了BAX系统，该系统也是最早进入我国的快速致病菌分子生物学检测系统。目前该系统主打机型是BAXQ7，硬件采用了ABI 7500平台，在此基础上开发了软件系统及试剂盒，可检测项目主要包括：沙门氏菌、李斯特菌属。单核增生李斯特菌、弯曲菌、大肠杆菌0157、肠杆菌、霉菌和酵母菌、弧菌等。 BAX系统的检测项目多采用传统的SYBER green探针，由于此探针的非特异性，对于食源性致病菌的检测而言，BAX的检测假阳性概率很高。另外，BAX的每个检测项目对于不同的食品样本，检测流程也各有差异，这也给实际检测增加了工作量和难度。但由于该系统检测项目较多，进入中国市场较早，目前很多实验室采用。 2、GDS系统及其检测方法 美国BioControl公司推出的GDS系统全称“全自?致病菌磁珠富集和基因检测系统”，同其他检测系统不同，GDS对于样本中的目标菌先采用专利设计的PickPen免疫磁珠提取系统进行富集，再选用旋转式的RT-PCR仪进行硬件检测，使得检测结果更准确、更灵敏，并且缩短了检测所用的时间。 (1)PickPen免疫磁珠提取系统 BioControl公司针对PCR方法在致病菌检测方面的弱点，设计了专利的PickPen免疫磁珠提取系统。这一系统的应用使得目标菌在增菌液中被磁珠捕获、提取，有效地去除了PCR反应的抑制因素。这样不仅保证了检测结果的灵敏度，比增菌液直接操作提高10-100倍，而且检测信号更准。另外，该过程操作简单，替代了选择性增菌过程，将检测时间缩短20小时左右。 (2)Rotor-Gene旋转基因检测仪相比传统PCR仪的两大特点 首先，Rotor－Gene旋转基因检测仪的探针采用MGB探针，和多通道系统的RT－PCR检测仪结合，提高了系统检测的特异性；其次，GDS系统所采用的离心转子式定量PCR仪是现今最精确的多功能real－time PCR仪。PCR反应管在整个反应过程中以400rpm的速度离心，所有样品在快速升、降温过程中始终保持温度的高度致性。孔间温度均一性可达0.01℃，优于目前市场上性能最好的模块加热仪器(0.1℃)10倍。升、降温速度可达15℃／s，40个循环实验只需45分钟。此外，样本保持全程离心的方式可以防止液体的挂壁和气泡，省去了手工离心的麻烦。同时，也确保了每个样本具有相同的检测光程，无须ROX校准。 以沙门氏菌检测为例，传统国标检测方法需要4天左右的时间进行定性检测，GDS可以在1天的时间内完成对沙门氏菌的定性检测。 GDS检测方法也是美国食品检测实验室目前阶段采用最多的检测方法，美国农业部有接近60％的分子生物学检测实验室采用了该检测方法。另外在美国，BioControl也是得到AOAC(官方化学家协会)认证最多的公司。 3、IQ cheok系统及其检测方法 美国Bio－Rad(伯乐)公司食品科学部的前期隶属于法国巴斯德研究院，至今和巴