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番茄红素对环孢素所致大鼠肾毒性的保护作用 辛艳飞，刘书朋，邓祖跃 　　环孢素(Cyclosporine，CsA)是预防器官移植后排斥反应的基础免疫抑制剂，而CsA所引起的剂量依赖性的急、慢性肾衰竭限制了其临床应用。研究发现，近30％的CsA使用者会出现中度或重度的肾毒性。虽然CsA引起肾毒性的机制尚不完全清楚。但通常认为CsA肾毒性与肾素-血管紧张素系统激活、内皮素合成增加等因素密切相关。近年有研究表明，CsA引起的氧自由基增加进而导致细胞膜脂质过氧化是其肾毒性重要原因之一，而外源性抗氧化剂(N-乙酰半胱氨酸、维生素E等)可有效抵御CsA对实验动物引起的肾毒性。番茄红素(lycopene，LP)是一种重要的类胡萝卜素，具有很强的抗氧化和清除自由基功能。本实验中，我们利用大鼠CsA肾衰模型考察了LP对于CsA致肾毒性的保护作用及其作用机制。 1　材料与方法 1．1　试验药物　番茄红素(香港雷允上诵芬堂药铺有限公司)，临用时用0.5％羧甲基纤维素稀释至所需浓度。 1．2　动物　SD大鼠，♂，200～250g，购自浙江省实验动物中心。饲养于全封闭清洁级动物房内，温度20～25，相对湿度50～60％。整个实验过程喂饲全价营养颗粒饲料，自由饮用经净水器过滤后装入无菌饮水瓶内的城市自来水。 1．3　试剂　环孢素(浙江瑞邦药业有限公司)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 1．4　方法　大鼠分成4组，每组8只，分别为对照组、LP组、CsA组和LP＋CsA组。其中对照组和CsA组大鼠每日po给予0.5％羧甲基纤维素(10ml／kg)，连续20d；LP组和LP＋CsA组大鼠每日po给予LP 10mg／kg，连续20d。CsA组和LP＋CsA组大鼠在给予CMC或LP 6d后同时每日po联合给予CsA 50mg／kg，连续14d。实验期间每周记录大鼠体重一次。 1．4．1　肾功能检测　实验结束时，用代谢笼收集大鼠24h尿液。大鼠用乙醚麻醉，腹主动脉采集血样，2500rpm离心30min制备血清。用7020型HITACHI自动生化仪(Japan Hitachi Medico.)测定血清与尿肌酐(creatinine，Crea)以及血清尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)水平，同时利用如下公式计算内生肌酐清除率(creatinine clearance，Ccr)，Ccr＝[尿肌酐浓度×1h尿量]／血清肌酐浓度／体重。 1．4．2　SOD活性和MDA含量测定　动物处死后，手术分离肾脏，置4生理盐水洗净。1g肾脏样品置于10ml PBS中，用匀浆机匀浆10min，匀浆液1500rpm离心30min，用SOD和MDA试剂盒测定上清液中的SOD和MDA酶活性。Folin-酚试剂法检测蛋白浓度。 1．4．3　组织病理学检查　肾组织用10％福尔马林固定过夜，脱水后石蜡包埋。常规制片，HE染色，光镜下观察。 2　结　　果 2．1　LP和CsA对大鼠体重和与肾功能的影响　对照组和LP组大鼠具有相似的体重增长率和血清肌酐、尿素氮水平。连续给予CsA 14d显著降低大鼠的相对体重增长率，同时引起大鼠肾功能衰竭(血肌酐和尿素氮升高、肌酐清除率降低)，联合给予LP 10mg／kg则可以显著改善CsA引起的体重增长率下降和肾功能衰竭，如表1。 2．2　LP和CsA对大鼠肾脏MDA和SOD的影响　对照组和LP组大鼠肾脏MDA水平基本相似。给予CsA显著增加了大鼠肾脏MDA含量，而联合给予LP则可以有效缓解CsA引起的肾脏MDA升高。大鼠肾脏SOD酶水平CsA组明显低于对照组，虽然单用LP对肾脏SOD水平无显著影响，但LP可防止CsA引起肾SOD水平下降，见表2。 2．3　LP和CsA对大鼠肾脏组织病理学的影响　HE染色，在光镜下对照组(图1A)和LP组大鼠肾脏未见明显的组织病理学改变，CsA引起肾脏细胞损伤主要表现为细胞排列紊乱和小管萎缩(图1B)，LP＋CsA组则仅出现少量小管萎缩，细胞整体排列整齐(图1C)。 3　讨　　论 　　文献报道，CsA所致肾毒性主要表现为临床患者或实验动物肾脏器质性(肾小管萎缩、细胞空泡变性等)和功能性(肾脏功能衰竭)的改变。本研究中，连续14d灌胃给予CsA(50mg／kg)，大鼠出现明显的肾毒性，表现为血清Crea与BUN水平升高，Ccr下降，肾脏组织出现大量细胞排列紊乱和肾小管萎缩。与Walker等研究发现一致。本实验证实作为脂质过氧化主要指标的MDA在肾脏的水平也随着CsA的累积而显著升高，而作为体内清除氧自由基的重要酶SOD活性则随着CsA所致肾功能衰竭的出现而下降。这些结果表明CsA引起的氧自由基增加