仪器分析技术二2011.ppt

第三章 常用仪器分析技术（二） ? 光谱分析法概论 ? 紫外-可见分光光度法 ? 荧光分光光度法 ? 原子吸收分光光度法 荧光分光光度法 一、基本概念 1. 光致发光 有些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光之外还会发射出比原来所吸收光的波长更长的光。 最常见的光致发光现象是荧光和磷光。 2. 荧光（fluorescence） 物质在吸收光能之后产生的一种发射光，即物质分子接受光子能量被激发后，从激发态返回基态时发射出的光。 当物质分子吸收了一定波长的紫外光能后，基态电子跃迁到第一激发态，处于激发态的电子首先以无辐射方式下降到第一激发态的低能级，而后再回到基态时，所发射的光即荧光。 3. 荧光分光光度法 利用物质的荧光现象而建立的分析方法。 根据物质的荧光强度进行含量测定。 属于分子发射光谱法。 优点： 灵敏度高，选择性好，检测限达10-10g/mL，甚至10-12g/mL，比紫外-可见分光光度法低3个数量级以上。 局限性 二、基本原理 定量的依据 荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系。 F=KC（不遵循比尔-朗伯定律） F 荧光强度 C 荧光物质的浓度 K 常数 F与物质吸收光能的程度(I-I0) 和物质产生荧光的效率(Φ)有关 Φ=发射荧光的光子数 / 吸收激发光的光子数 F= Φ(I0-I) 据Beer-Lambert定律 I=I010-ECL ↓ F= ΦI0(1-10-ECL) ↓ F = 2.3 ΦI0ECL = KC Attention： 吸收紫外光的物质只有一部分具有较高的荧光效率，可用荧光法测定含量。 在紫外光照射下能自发荧光的物质一定具有紫外吸收的生色团吗？ 三、荧光分光光度计 工作原理 四、定量分析方法 直接荧光法 适用：在一定条件下能产生较强荧光的毒物。 例：巴比妥类、苯骈二氮卓类、香豆素类和一些生物碱类毒物（自发荧光） 间接荧光法 适用：在一定条件下不能产生荧光或荧光很弱的毒物。 例：吩噻嗪类药物、普鲁卡因、苯丙胺（诱发荧光） ? 光谱分析法概论 ? 紫外-可见分光光度法 ? 荧光分光光度法 ? 原子吸收分光光度法 原子吸收分光光度法(atomic absorption spectrophotometry, AAS) 一、基本原理 2.原子吸收分光光度计问世的难点——光源 3.锐线光源（narrow-line source） 三、定量分析方法 标准曲线法 （1）配制一组系列标准溶液，在一定条件下测定吸 光度，绘制A-C标准曲线。 （2）在相同条件下测定供试品溶液的吸光度。 （3）用内插法由标准曲线求得检材中被测金属毒物的含量。 * 授课人：陈丽琴 第一节 光谱分析法 一、基本概念 二、基本原理 三、荧光分光光度计 四、定量分析方法 夜 明 珠——磷 光 荧 光 动 物 大 脑 神 经 彩 虹 图 荧光产生示意图 I0 I F 第一节 光谱分析法 一、基本原理 二、原子吸收分光光度计 三、定量分析方法 1.原子吸收线（吸收光谱）轮廓及参数 原子基态?第一激发态,吸收一定频率的辐射能量。 产生吸收线,反映原子的电子跃迁,与分子吸收光谱不同。 表征吸收线轮廓（峰）的参数： 中心频率：?O（峰值频率） 半 宽 度: Δ?1/2 1/2 钨丝灯光源和氘灯，经分光后，光谱宽度0.2nm。 原子吸收线的半宽度：10-3nm。 若用一般光源（连续光源经单色器分光）照射时，原子吸收光的强度变化仅为0.5%，灵敏度极差。→ 原子吸收检测需要宽度很窄的光源。 → 满足原子吸收检测的高分辨率的单色器难以实现。 → 如何解决 ？ 用待测元素为材料制成的带宽很窄的锐线光源，解决了原子吸收测量中的困难，利用金属元素的自吸收特点。 何为锐线光源？ （1）光源的发射线与吸收线的V0一致 （2）发射线的ΔV1/2小于吸收线的 ΔV1/2 如何产生锐线光源？ 产生锐线光源的装置为空心阴极灯； 空心阴极灯发射极以待测元素为材料制成，每一种元素都有自己的特征发射线，发射线的宽度很窄（约0.002-0.005nm），波长范围在紫外和可见光区； 每检测一种元素的原子吸收，更换一种空心阴极灯。 二、原子吸收分光光度计 原子吸收分光光度计与紫外可见分光光度计在仪器结构上的不同点： （1）采用锐线光源。 （2）分光系统在火焰与检测器之间。 锐线光源 原子化器 1.工作流程