关于HPLC的基础知识(中文).ppt

液相色谱（LC） 高效液相色谱（HPLC） 分析分离手段 色谱 广义概念 高效液相色谱（HPLC） 高效液相色谱（HPLC） 凝胶渗透色谱（GPC） 离 子 色 谱（IC） 广义概念 狭义概念、反相色谱 高效液相色谱基础知识（HPLC Basic） HPLC 基础1 High Performance Liquid Chromatography 或者 High Pressure Liquid Chromatography 的略称 『高效、高压液相色谱』 ☆何为液相色谱？ 使用色谱柱进行液体/态样品分析分离的手段。 基础2 　 Chromatography一词中「Chromato」的英文意思为「色」。 Chromatography ┉┉ 分析技术 Chromatograph ┉┉ 分析仪器 Chromatogram ┉┉ 色谱图、图谱 基础3 HPLC仪器的构成 检测器 泵 脱气装置 柱温箱 进样器 电信号 数据处理系统 基本组成① 脱气装置 将洗脱液中氧气等其它气体除去的装置。 真空腔内装有特氟纶（聚四氟乙烯）管，以特氟纶管作为膜将气体除去。 常用的脱气方式有:吹氦脱气法、低压脱气法、超声波脱气法。 真空泵 真空腔 基本组成① 脱气装置 洗脱液进入高压泵前应充分脱气，目的是： 1、气泡留在泵中影响泵的正常工作，使洗脱液的压力不稳，造成基线的噪音增加； 2、洗脱液中的氧能破坏样品，降低检测器的灵敏度； 3、当洗脱液流出色谱柱进入检测器时，由于洗脱液压力下降，产生气泡，影响检测器正常工作。 基本组成② 泵 往进样器 系统中的送液装置 泵的重要之处： ① 可以在高压下使用 ② 压力的变动小　 ③ 以恒定的流速将洗脱液压送至色谱柱 综上所述，对泵的精度要求是非常高的。 泵的构造 放大 柱塞向右运动时，上面的球形单向阀会向下运动；下面的球形单向阀会向上运动。当柱塞向左运动时，球形单向阀的运动方向相反。 球形单向阀 柱塞密封圈 柱塞泵柱塞 泵的工作原理 球形单向阀的内部构造 Cartridge Spacer Check Valve Guide Sheet Packing Sheet Packing 排出侧 吸入侧 基本组成③ 1 2 3 6 5 4 将分析对象/样品导入色谱柱的装置。 最近，可以完成自动进样的自动进样器/装置已成为主流。 进样器 泵 色谱柱 进样环 基本组成④ 柱温箱 　使色谱柱保持一定温度的装置。 柱压是色谱柱工作中的一个重要指标。当使用粘度较高的洗脱液时，通过提高柱温可以降低洗脱液的粘度。另外，使用柱温箱可以避免由于室温改变而导致柱分离时间改变的情况发生。 可以说，柱温箱是高效液相色谱分析装置中的不可缺的部件。 基本组成⑤ 检测器 系统中检测样品经柱分离出的各组分的装置。 根据样品、感度等性质的不同，检测器可分为： 1. 紫外可见光检测器（UV-8020） 2. 示差检测器（RI-8020、RI-8021） 3. 电导率检测器（CM-8020） 4. 电化学检测器（EC-8020）　　 其他还有荧光检测器、光散射检测器等多种检测器。 紫外可见光检测器 石英杯 原理与分光光度计相同 OUT（ABU）＝log　 透过光 吸收光 Ref（透过光） Sam（吸收光） 通常表示为：1ABU/1V或 Record Lens/10ｍV 光 吸収光 透过光 UV检测池 示差检测器 Ref Sam Ref Sam 受光部 利用各检测池中溶剂折射率差异的检测器。 可以识别溶剂组成上的些微区别。（显示为色谱峰的差异） 检测两者折射率之差 通常表示为：256×10-6RIU/1V 或Record Lens/10ｍV 基本组成⑥ 数据处理装置 　根据检测器检测出的电信号进行数据计算/处理的装置。 过去使用描笔式记录仪进行色谱谱图的确认。现在大都使用计算机进行数据的采集、处理分析等工作了。 分析结果举例 Column: TSKgel ODS-100V 　　　　　　 (4.6mmI.D. x 15cmL) Eluent: 0.1% TFA in (H2O/CH3CN=99/1) Flow rate: 1.0mL/min Detector: UV (270nm) Injection vol.: 5μL Column temp.: 25℃ 1: L-ascorbic acid 2: nicotinamide 3: nicotinic acid 4: thiamine 5: pyridoxal 6: pyridoxine 1 2 3 4 5 6 基本组成⑦ 色谱柱 FLOW 进样一侧 往检测器 色谱柱是样品中不同组分得以分离的场所。