实验一氨基酸的分离鉴定.ppt

* * 实验一、 氨基酸的分离鉴定 --纸层析法 胡永红 yonghong79@163.com 一、实验目的： 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本 原理及操作方法。 二、实验原理： 层析法也叫色谱法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在固定相和流动相中，并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。 层析法根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。 纸层析属于分配层析法。分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离。 纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。 当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。 一种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，也就是分配系数（a）。 物质在溶剂I中的浓度 a = ——————————— 物质在溶剂II中的浓度 物质被分离后在纸层析图谱上的位置用Rf值来表示： 原点到层析点中心的距离 Rf = ————————————— 原点到溶剂前沿的距离 某一种物质在特定的溶剂系统、纸、展层方式、温度、pH等条件下的Rf值基本上是常数。 茚三酮颜色反应： 1）蓝紫色化合物，570nm 2）黄色化合物，440nm 赖氨酸 脯氨酸（黄色） 缬氨酸 苯丙氨酸 亮氨酸 *