hNUDC基因有效RNAi靶序列的快速筛选及其慢病毒干扰载体构建.pdf

及其慢病毒干扰载体构建 专业：遗传学 硕士生：杨芳 导师： 徐培林教授 摘 要 巨核细胞产生血小板是一个复杂的过程，受到多种细胞因子的调控，血小板 导信号传导通路，在体外刺激巨核细胞集落(CFU．MK)形成，在体内升高血小 板的水平。但在巨核细胞成熟和血小板形成的过程中，TPO并不是必须的细胞 因子。 此前，本实验室以Mpl胞外区为诱饵，利用酵母双杂交系统从人胎肝cDNA 序列相同。hNUDC是一种在多种细胞中与微管动力中心结合并且相互作用的多 功能蛋白。经进一步的研究发现，hNUDC作为Mpl的一个新配体，在巨核系细 胞的发育成熟和血小板的生成中也具有重要的作用，可以激发许多与TPO相同 的生物反应。TPO主要作用于巨核细胞增殖成熟的阶段，而11NUDC主要作用于 巨核细胞分化的晚期阶段和血小板的形成阶段。 存在着相互影响的关系，在前期研究成果的基础上，本论文构建了下调心ⅣDC 表达的RNA干扰(I斟础)慢病毒载体，并在293T细胞中进行包装和初步的体外 感染实验，获得了特异性高、感染效