代谢调节2 (恢复)的.ppt

第四节 微生物的代谢调控;? 但是，在工业生产中却往往需要单一地积累某种产品，这些产品的量又经常是大大地超出了细胞正常生长和代谢所需的范围。;一、克服反馈抑制和反馈阻遏的调控;1、降低末端产物浓度; 营养缺陷型突变株的代谢流受阻，末端产物减少，解除了末端产物参与的反馈调节，可使代谢途径中的某一中间产物积累。;A; 但是，完全不能合成产物E的突变体，因为不能利用E去进一步合成必须的细胞物质，所以无法正常生长。为了保证突变体的正常生长，培养时须提供低浓度的、不足以引起反馈调节的物质E。这样高浓度的中间产物C就能积累起来了。;A;谷氨酸棒杆菌的IMP合成途径和代谢调节; 在分支途径中，如果减少某一末端产物的浓度，常常可以积累另一末端产物。;;内容回顾;2）渗漏缺陷型的利用;*;3）提高细胞渗透性;? 谷氨酸生产菌的细胞膜磷脂含量高时，细胞的通透性较差，磷脂含量低时，通透性较好。;2、抗反馈调节突变株的利用;*;*;*;*;*;*;*;*;从营养缺陷型的回复突变株也能获得抗反馈的突变菌株;; 发生回复突变后，虽然酶的催化活性恢复了，末端产物仍然能生成，但很可能酶的氨基酸序列发生了变化，变得对反馈不敏感了。这样的回复突变株便能过量地积累末端产物。;二、克服分解代谢阻遏的调控;2、流加碳源或氮源;三、对诱导调节的控制;1、添加诱导物类似物;2、添加辅酶或辅助因子;3、利用组成型突变株;组成型突变株的筛选方法;*;*;代谢工程(Metabolic Engineering) ——利用生物学原理，系统分析细胞代谢网络，并通过DNA重组技术合理设计细胞代谢途径及遗传修饰，进而完成细胞特性改造的应用性学科。;? 代谢工程的实质在于对代谢流量及代谢控制进行定量分析，在此基础上利用基因工程技术进行代谢改造，最大限度地提高目的代谢产物的产率。;代谢流分析： 是一种专门对代谢途径流量进行测定分析的方法，该方法假定在一定条件下，细胞内的物质与能量处于一个拟稳态，通过测定细胞内、外物质浓度的变化，根据细胞代谢途径中各反应的计量关系以及实验的某些底物、产物的通量及细胞组成等确定整个代谢网络的通量分布。 ;代谢控制分析： 针对细胞内外环境的不稳定性揭示细胞代谢的动态变化规律。它是以代谢生化反应体系的敏感性分析为基础，研究分析代谢控制的各途径之间的分配规律，是一种以系统的观点对细胞内代谢调控进行定量分析的理论和实验方法。一般以数学模型的形式表征，对细胞代谢的控制机制提出定量的解释。;二、代谢工程的基本过程;2) 基因操作;3）效果分析;三、代谢工程的基本原理;5）涉及细胞生理状态平衡的细胞生理学原理，是一个代谢速率和生理状态表征研究的理想平台。;四、代谢工程的应用;1、改变代谢途径;1）加速限速反应;2）改变分支代谢途径流向;例如： 芳香族氨基酸合成途径中，色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸三条支路上，任一支路的酶活性被加强，其与另两条支路的竞争将占据优势。 从谷氨酸棒杆菌K86中提取质粒pCDtrp157, 该质粒带有DAHP合成酶基因和色氨酸合成酶基因。 如将该质粒转化至谷氨酸棒杆菌JY9182 ，使该菌可产色氨酸1.1g/L。;3）构建代谢旁路; 例如： ;4）改变能量代谢途径;2、扩展代谢途径;3、转移或构建新的代谢途径;如 将真养产碱菌的PHB 操纵子 （PHB 多聚酶、硫解酶、还原酶）克隆到大肠杆菌, 重组大肠杆菌就可积累PHB.;PHB; phbC ;PHB granules in recombinant E.coli ;*