3型鸭甲型肝炎病毒逆转录环介导等温扩增技术快速检测方法的建立.pdfVIP

Vo l. 38 ,No.12 中国预防兽医学报 第 38 卷第 12 期 Dec. 2016 2016 年 12 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine doi: 10.3969/j .issn.1008-0425.2016.12.09 3 型鸭甲型肝炎病毒逆转录环介导等温扩增技术 快速检测方法的建立 张映，范书才\张兵，陈玲，秦义娴 (中国兽医药品监察所，北京 100081) 摘 要:为建立一种3 型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的快速检测方法，本研究针对 DHAV-3 VPl 基因序列中 的 8 个不同区段设计了 3 对特异性引物，并对反应体系进行优化，通过加入姿基荼盼蓝(HNB)实现对反应结果的 可视化观察，建立了检测 DHAV-3 的逆转录坏介导等温核酸扩增(RT-L灿的方法，采用已建立的方法对人工感染 雏鸭的血清样品和病死鸭府组织样品提取灼核酸进行了检测。结果显示，该方法仅对 DHAV-3 的 RNA 进行扩 增，而对 l 型鸭甲型Æt炎病毒(DHAV-l) 以及鸭常见的病原 RNA 均无扩增反应;可以检测出 10 拷贝 /μL 的 DHAV-3 RNA，其敏感性为 RT-PCR 的 1000 倍;最低能够检测到相当于1.1个 DELD细的 DHAV-3; 能够检测到 人工感染雏鸭血清和病死鸭肝组织中的 DHAV-3; 上述结果表明该方法能够特异、灵敏、快速地检测 DHAV-3 ， 而且使用方便。 关键词: 3 型鸭甲型肝炎病毒; RT-LAMP; 检测 中圄分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2016)12-0963-05 Development of a reverse transcription loop-mediated isothermal amplification for duck hepatitis A virus type 3 detection ZHANG Ying , FAN Shu-cai, ZHANG Bing , CHEN Ling , QIN Yi-xian (China Institute of Veterinary Drug Control , Beijing 100081 , China) Abstract: In order to establish a rapid detection assay of duck hepatitis A virus type 3 (DHAV-匀， the reverse transcription loop-mediated isothennal amplification (RT-LAMP) was developed with three pair primers targeting VPl gene sequence of DHAV-3 for the detection of DHAV-3 , and the amplification result was visualized by adding the dye of HNB. DHAV-3 in the serum and liver tissue samples 仕om the artificial infection ducklings