3种鱼类弹状病毒荧光定量环介导等温扩增检测方法的建立.pdfVIP

第 37 卷第 11 期 中国预防兽医学报 Vo l. 37 ,No.11 Nov. 2015 2015 年 11 月 Chinese Joumal of Preventive Veterinary Medicine doi: 1O .3969/j.issn.1008-0589.2015.11. 1O 3 种鱼类弹状病毒荧光定量环介导等温扩增检测方法的建立 陈珍容 1 ，陈进会2 ，陈 沟 3 ，唐大运气石 磊 3 ，颜其责 V (1四川农业大学动物医学学院，四川温江 611130; 2. 东莞出入境检验检疫局，广东东莞 523072 ; 3. 广州迪澳生物科技有限公司，广东广州 510012) 摘 要:鲤春病毒血症病毒(SVCV) 、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)和传染性造血器官坏死病病毒(1四W) 是严重危害水产养殖业的 3 种鱼类弹状病毒。为建立这3 种鱼类弹状病毒的快速检测方法，本研究设计合成针对 这 3 种病毒系列引物，并在扩增反应体系中加入荧光染料 SYBR Green 1. 通过恒湿荧光检测仪 Deaou-308C 扩增 检测，分别建立了这 3 种病毒的荧光定量环介导等温 RNA 扩增(RT-LAMP)方法。经反应条件的优化，检测结果 显示，这 3 种方法分别对 SVCV、 VHSV 和 IHNV 3 种弹状病毒具有特异性的扩增反应，对传染性放坏死病毒、 狗鱼弹状病毒和牙绊弹状病毒核酸的扩增结采均为阴性，具有良好的特异性。灵敏度试验最低检测限分别为 0 4 4 4 拷贝 拷贝 拷贝 该方法在 4.0x10 /μL 5 .4 x10 /μL 4.3x10 63 C 下保温 40 min 可以完成检测，操作简羊、 /μL 、 、 灵敏度高、特异性强，通过恒温实时荧光枪测仪可实时检测及自动在lJ 读检测结果，适合现场检洲和口岸快速检 测。 关键词:鱼类弹状病毒;恒温荧光定量;坏介导等温扩增 中图分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2015)11-0856-05 Establishment of 3 fish rhabdovirus real-time fluorescent loop-mediated isothermal RNA amplification assay J 2 3 3