J亚群禽白血病病毒套式PCR检测方法的建立.pdfVIP

• 60 • 生物技术 中国畜牧兽医 2012 年第 39 卷第 12 期 J 亚群禽白血病病毒套式 PCR 检测方法的建立 陈国强l ，刁富花2 (1.青海省西宁市渔中县土门关乡兽医站，青海西宁 811603;2. 青海省大通县后子河兽医站，青海大通 810105) 摘要:本试验根据 GenBank 中登录的禽白血病病毒(ALV)基因组序列，设计合成了 2 对引物，外部引物的扩增片段大小 为478 句，内部引物的扩增片段大小为 314 bp ，建立了适合 ALV 快速检测的套式 PCR 方法(nested-PCRl 。采用该方法对 ALV 毒株进行了检测，试验结果表明，能扩增到 314 怜的条带，禽流感病毒(H9 亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减 蛋综合征病毒、禽网状内皮增生病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第 1 次扩增的敏感性是 100 pg ，第 2 次扩增的敏感性是 1 fg ，第 2 次比第 1 次扩增的敏感性高 105 PCR 方法具有敏感性高、重复性 倍。所建立的套式 好、特异性强等优点，可用于禽白血病病毒(ALV) 的临床诊断和分子流行病学调查等。 关键词:禽臼血病病毒;逆转录套式 PCR; 检测 中图分类号:Q78 文献标识码:A 文章编号: 1671-7236(20 12) 12-0060-04 鸡J 亚群白血病病毒(avian leukosis virus sub 性成熟前后的肉种鸡(崔治中， 2007 )。杜岩等 group J ， ALV一J)是禽白血病 (avian leukosis) 病毒 (2000) 首次报道从市场上临床健康的商品代肉鸡中 分离检出了 ALV-J ，并先后从Ilj 东、河南、宁夏等省 众多亚群之一，主要引起以免疫抑制、生长抑制和髓 分离和鉴定了多株 ALV-]，这表明 J 亚群白血病已 细胞癌变为特点的传染性致骨髓细胞瘤疾病或成髓 性白血病(殷震等，1997; Saif ， 2005; 崔治中，200 1)。 在中国鸡群中广泛存在(杨玉莹，2003; Himly 等， 被列为鸡群中除马立克氏病病毒(Marek s disease 1998 ;Qin 等， 200 1)。 virus ， MDV) 和禽网状内皮组织增殖病病毒(reticu 目前，对于禽白血病的检测和诊断主要依赖于 loendotheliosis virus ,REV) 以外的第 3 类政肿瘤病 ELISA、琼脂扩散试验等，但琼脂扩散试验敏感性较 差，而 ELISA 诊断试剂盒因纯化抗原不易得到，致 毒(Pay町等，1991; 徐镇革等， 2002) 。有关该病发 使价格昂贵且较难实现商品化，使得该病不能及时 病率的报道不尽相同，一般在 3%~30% ，发病鸡通 做出准确的诊断，从而严重影响该病的流行病学监 常呈死亡经过。多数感染鸡无特征性临床症状，但 测和净化，造成重大的经济损失(顾玉芳等，2004; 延迟性成熟、蛋小、蛋壳薄、产蛋量下降、受精率和孵 Xu 等， 2004 ;胡北侠等， 2009 )。因此，为了提高 化率低、慢性消瘦、肉品废弃等，造成较大直接经济