LAMP法检测儿童粪便中肠道腺病毒的建立.pdfVIP

中国人兽共患病学报 124 Chinese Journal of Zoonoses 2016 , 32 (2) DOI: 10. 3969/j. issn. 1002 - 2694.2016.02.005 LAMP 法检测儿童粪便中肠道腺病毒的建立 赵娜1 , }ÌIJ 金臣，孙殿兴2 摘 要:目的 通过应用环介导等温扩增(LAMP) 建立「种快速、简便的可视化检测儿童肠道腺病毒核酸的方法。方法 登录 GenBank 网站下载腺病毒 40 和 41 基因型的六邻体序列，根据该区段的保守序列设计 4 条 LAMP 引物。将反应体系加 入 EP 管，在恒温条件(65 C) 扩增 60 min 后，再以凝胶电泳和钙黄绿素染色评价 LAMP 法的特异性和灵敏度，并和 PCR 法的 结果相比较。最后，同时用 LAMP 和 PCR 法对 40 份可疑临床祥本进行检测，应用卡方检验进行统计学分析。结果 LAMP 法能准确地使腺病毒 40 和 41 型得到扩增，酶切结果也正确，显示了 LAMP 法较好的特异性。 LAMP 的灵敏度比 PCR 高约 10 倍。经过对 40 份临床样本的检测 .LAMP 与 PCR 均没有发生非特异扩增， LAMP 法和 PCR 法的一致性为 92.5% CP0.05) 且 LAMP 法没有漏检阳性样本。另外，使用钙黄绿素染色的方法更好地显示了产物检测的可视性和简便性。结 论 该研究初步建立了快速、简便、可视化检测肠道腺病毒的 LAMP 技术，在基层医疗机构有一定的实用价值。 关键词:肠道腺病毒;环介导等温扩增(LAMP) ;儿童 中图分类号:R373 文献标识码:A 文章编号: 1002 - 2694(2016 )02 - 0124 - 04 Detection for enteric adenovirus in children by a loop-mediated isothermal amplification method ZHAO Na 1 ,LIU Jin-xia 1 ,SUN Dian-xing2 (1. Chengde Medical University , Chengde 067000. China; 2. Bethune International Peace Hos户ital. Shijiazhuang 050082 , China) Abstract: We aimed to establish a rapid , simple and visualized nucleic acids detection method for enteric adenovirus in chil dren by loop-mediated isothermal amplification(LAMP). Firstly. we logged in GenBank and downloaded the hexon genetic re gion of adenovirus genotypes 40 and 4 1. Four LAMP primers were designed according to its conserved region. The amplifica tion was completed by incubating a 1l reagents in an EP tube under the isothermal condition (65 C) for 60 min. Then , the spe- cificity and sensitivity o