Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究.pdfVIP

使中化学与生物物理进展阳g，m 的蜘chen旧时oodB即hy酬， 2006， 33(1); 39~44 PUJIJIJ IJ Tet调控STGC3 基因表达 CNE2 细胞系的 建立及其功能初步研究* 邓敏贺修脏罗桥赵帅 t 越学丰色兰 (商华大学肿4菌研究所，橱阳 421001) 摘要 利用 Tet制调控系统，磁立受强力Z辈革挂满导 STGC3 ~在日~1盖达的 CNE2 细胞系，为迸…zv研究STOC3 的功能提供了 一个理想的实验平台先后将调控股粒pTet-on 和反应质粒pTRE- STGC3 转染入。也2 细胞，并FIl 0418 和湖事草盖骨分别逃行 闵轮筛选，运用 RT-PCR 选择对强力草草索诱导敏感的细胞~隆.用不问浓度强力草草繁诱导 CNE21 Tet IpTRE-STGC3 细胞， RT-PCR枪测 STGC3 的表达，确定强力革毒素的最佳诱导w.1!l.. 采用此浓度的强力德素分别诱导CNE2、。也2 厅咐四E、 α、ffi2 厅et巾TRE-STOC3 ..气组细胞，测定细胞的t长陶线、克隐形成察和细胞周期分布诱导 STOC3 荡因高表达， CNE2 细 胞增殖浓度践表械愤 (P0.05). ~隐形成能力跟著降低 (P 0.01) ， 流5吃细胞仪检测绩果报示， i窗细胞麟体中处于 GO/G1期 细胞数增加，细胞阻精于00/01 期丁.1 诩挖STGC3 盖章即农主主 CNE2 细胞系的成功臻立，为进一步研究STCC3 基因的功能提 供…个理想的细胞模型 关键询 董事咱瘤， STGC3 基因， Te问n 基凶表达系统 学科分集号 R73-3 摔啊?应 (nasoph础-yngeal carcinoma , NPC)在中 1 材料和方法 自商方各省及东南亚地区发病率较高，应号常见上皮 1.1 材料 源性恶攸』中?黯之一，其发生具有明显地域惊和家庭 1.1.1质粉与商栋，含 STGC3 然因编码区的 聚集现象.目前研究表明， NPC 的发伎与 EBV 感 pcDNA3.l (+)- STGC3 .1轰级质较由本案构建啕 染、饮食、地理及逃，怜理事多种因条有关，是堂皇f奇和 pTet-on 和 pTRE 质粒由巾雨大学肿瘤研究所贺智 环境等诸多5日亲相泛协|诗作用所致[1 11 现代分子肿 敏博士惠赠.商株肌f109 为本室保存 瘸学研究证实， NPC 夜多条染色体存在商频~杂 1.1.2 细胞鼻闻自瘤细胞系 CNE2 为低分化鼻刷鳞 合性丢失(loss of heterozygosity , LOH) 位点 2 状细胞瘤细胞系，由中目前预防眩学科学院~系，并 3p14~挝、 llq、 13q 等护明，尤其是 3p21~26 区 由本重在培养提供以盯MI 1640 (含 10%新1:4底 域杂合性丢失高达 66.70% ，提示这些区域可能存 消)地养基， 2量 37C 、 5%CO，、饱和湿度的二氧化 在E某种或某将来知的与 NPC 发姐:发展模切相关的 碳培养箱增养. 抑瘤2基因. STGC3 ~基因是本窒从NPC 普普频率 LOH 1.1.3 主主要试)\-1J. TRIzol 试剂、 T4DNA 连接麟、 f主点 3p21 区域的 ESTs 辛苦孚所5î隆的一个鼻咽癌