串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5表位蛋白间接ELISA方法的建立.pdfVIP

• 43 • 中国畜牧兽医 2014 年第 41 卷第 4 期 生物技术 串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 表位 蛋白间接 ELISA 方法的建立 陈如敬，吴学敏，车勇良，王隆相，刘玉涛，严山，魏宏，庄向生，周伦江 (福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建福州 350013) 摘要:利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV) GP5 抗原表位串联表 达重组蛋白作为包被抗原，建立检测 PPRSV 抗体的间接 ELISA 方法。重组蛋白最佳包被浓度为 7.5μg/mL，最佳封闭液为 5%脱脂奶粉，37 C 封闭 2 h; 血清最适稀释度为 1 : 100 , 37 C 作用 2 h; 兔抗猪 IgG/辣根酶(HRP) (l : 3000) , 37 C 作用 2 h; 37 C 避光显色 15 min 读取 D nm 值。结果经统计学分析得出，S/P 值?0.254 为阳性，S/P 值(0.212 为阴性。所建立的 450 ELISA 方法检测其他 5 种猪常见病原阳性血清，其 D nm 值均小于 0.212 ，利用建立的 ELISA 方法对临床免疫勃林格殷格 450 翰猪繁殖与呼吸综合征活疫苗 4 周后的猪血清 70 份进行检测，其 D nm 值均大于 O. 邸，表明本研究建立的重组 GP5 表位蛋 450 白间接 ELISA 方法可用于临床样品的监测。 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒;重组 GP5 表位蛋白;间接 ELISA 文章编号:1671-7236(2014)04-0043一04 中图分类号:Q78 文献标识码:A 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and 活性的分泌型蛋白纯化后的重组蛋白为包被抗原建 respiratory syndrome , PRRS) 是由 PRRS 病毒 立间接 ELISA 方法，并进行条件优化，建立一种可 以临床监测 PRRSV 抗体的间接 ELISA 方法。 (PRRSV) 引起的一种以娃振母猪繁殖障碍和仔猪 1 材料与方法 的呼吸道症状为特征的高度接触性传染病(Cho 等， 1. 1 病毒和血清 猪繁殖与呼吸综合征病毒 2006;Chand 等，2012) 。该病于 1987 年在美国首次 (PRRSV) 阳性血清、猪流行性腹泻病毒(PEDV) 阳 被报道，并迅速蔓延到世界各地，给生猪养殖业造成 性血清、猪伪狂犬病毒(PRV) 阳性血清、猪瘟病毒 巨大的经济损失。郭宝清等(1996) 报道中国有该病 (CSFV) 阳性血清、猪圆环病毒(PCV2) 阳性血清、 流行，目前仍是危害中国养猪业的重要疫病(Zhou 等，2010) 0 PRRSV 属于动脉炎病毒科动脉炎病毒 猪细小病毒(PPV1) 阳性血清和猪标准阴性血清均 由福建省农业科学院畜牧兽医研究所畜病研究室保 属，为有囊膜的单股正链