马尾松紫色酸性磷酸酶基因PmPAP1的克隆与表达-林业科学研究.PDF

林业科学研究　２０１６，２９（６）：７９７ ８０６ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１６）０６０７９７１０ 马尾松紫色酸性磷酸酶基因ＰｍＰＡＰ１ 的克隆与表达模式分析 １，２ ２ １ 张　婷 ，丁贵杰 ，文晓鹏 （１．贵州大学农业生物工程研究院／生命科学院，山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室，贵州 贵阳　５５００２５； ２．贵州大学林学院，贵州 贵阳　５５００２５） 摘要：［目的］研究马尾松紫色酸性磷酸酶基因功能及其对低磷胁迫的应答。［方法］采用ＲＡＣＥ法克隆马尾松紫色 酸性磷酸酶（ＰＡＰｓ）家族成员ＰｍＰＡＰ１，利用软件和数据库，对基因结构功能进行多重分析预测，检测其接种外生真 菌及低磷胁迫下的表达模式。［结果］表明，ＰｍＰＡＰ１基因ｃＤＮＡ全长２５２０ｂｐ，开放阅读框１８６９ｂｐ，编码６２２个氨 基酸残基，具紫色酸性磷酸酶保守结构域特征，属于高分子量ＰＡＰｓ。ＰｍＰＡＰ１有信号肽，无跨膜区，推测定位于细胞 质基质或细胞器基质中，它与莲（Ｎｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａ）、无油樟（Ａｍｂｏｒｅｌｌａｔｒｉｃｈｏｐｏｄａ）的亲缘关系最近，相似性分别达 ７１％和６９％，进化关系古老、保守性强。时空表达分析表明，ＰｍＰＡＰ１的表达受外生菌根诱导，在不同组织中均有表 达，其根中的表达量显著高于茎和叶。在菌根化和非菌根化的幼苗中，ＰｍＰＡＰ１的表达均受基质中磷含量的影响， 表现为低磷条件下高效激活，高磷条件下其表达反而受到抑制。低磷胁迫下根系中酸性磷酸酶活性持续增高，说明 其活性与磷供给水平和时间有相关性。［结论］首次克隆鉴定了１个受外生菌根诱导的马尾松紫色酸性磷酸酶基 因，其参与了对低磷胁迫的应答，为深刻认识马尾松耐低磷的分子机制、遗传改良提供了新信息和新思路。 关键词：马尾松；外生菌根；紫色酸性磷酸酶基因；表达分析 中图分类号：Ｓ７９１２４８ 文献标识码：Ａ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰａｔｔｅｒｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ＰｕｒｐｌｅＡｃｉｄＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅＧｅｎｅｉｎＰｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａＬａｍｂ． １，２ ２ １ ＺＨＡＮＧＴｉｎｇ ，ＤＩＮＧＧｕｉｊｉｅ，ＷＥＮＸｉａｏｐｅｎｇ （１．ＴｈｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＲｅｓｏｕｒｃｅＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄＧｅｒｍｐｌａｓｍＩｎｎｏｖａｔｉｏｎｉｎＭｏｕｎｔａｉｎｏｕｓＲｅｇｉｏｎ（ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ）， ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｏｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５００２５，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５００２５，ＧｕｉｚｈｏｕＣｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］　Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｐｕｒｐｌｅａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｇｅｎｅａｎｄｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｄｅ ｆｉｃｉｅｎｃｙｓｔｒｅｓｓｉｎＭａｓｓｏｎｐｉｎｅ（Ｐｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａ）．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］　ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰＡＰｇｅｎｅ （ＰｍＰＡＰ１）ｗａｓｃｌｏｎｅｄｆｒｏｍｔｈｉｓｇｅｒｍｐｌａｓｍｂｙＲＡＣＥｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｍｕｌｔｉｐｌｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｓｏｆａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅ，ａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓ