偏肺病毒逆转录实时荧光定量PCR的建立及应用.pdfVIP

.216. 中华实验和临床病毒学杂志 2016 年4 月第 30 卷第 2 期 Chinese J Exp Clin Virol , April 2016 ,Vo l. 30 ,No. 2 ·技术方法· 偏肺病毒逆转录实时荧光定量 PCR 的建立 及应用 周杰英林应标曹友德段招军 423000 梆州，湖南省梆州市第一人民医院(周杰英，林应标) ;410005 长沙，湖南省人民 医院(曹友德) ;100050 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所(段招军) 通信作者:曹友德，Email: youdeI20@ ;段招军，Email: zhaojund@126.com DOI: 10. 3760/cma. j. issn. 1003-9279.2016.02.026 [摘要] 目的 建立偏肺病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR) ，并检测临床样本， 了解偏肺病毒感染患儿的临床流行病学特点。方法 针对保守基因 F 合成引物和探针，制备偏肺病 毒转录 RNA 标准品并建立标准曲线，检测线性范围、最低检测限、重复性、灵敏度和特异性。对采集 自 2010 年 12 月至2011 年 11 月兰州地区急性呼吸道疾病患儿的 222 份下呼吸道临床标本进行偏肺 病毒筛查，同时对阳性标本进行常见呼吸道病毒的共感染筛查，并对偏肺病毒进行相关流行病学分 8 /μ 析。结果 方法线性检测范围是 10_10 1 ，最低检测限是 10 拷贝/μ1 ，曲线相关系数是 1 ，扩增 拷贝 效率是9 1. 62 % ， Ct 值组内 CV 值小于 2% 。以传统 PCR 产物的测序结果为参照，逆转录实时荧光定 量 PCR 的敏感性和特异性分别是 100% 和 96.17% 。偏肺病毒检出 22 例(9.461毛) ，其中男童 13 例 (5.86%) ，女童 8 例(3.601毛)。春、夏、秋、冬的检出率分别是 15.71 1也、 0% 、 5.08% 、 1 1. 11%0 偏肺 病毒载量与混合感染、疾病种类、临床症状差异均无统计学意义。结论 该方法是检测偏肺病毒灵 敏度、特异性和重复性均较好的方法;偏肺病毒在兰州地区儿童呼吸道感染中占有重要地位，长期系 统的监测具有重要意义。 [主题词] 逆转录实时荧光定量 PCR;偏肺病毒 Establishment and application of Real-time quantitative PCR for human Metapneumovirus detection Zhou Jieying , Lin Yingbiao , Cao Youde , Duan Zhaojun The First People s Hospital of Chenzhou , Chenzhou 423000 , China (Zhou JY , Lin YB); Hunan Provincial People s Hospital , Changshα 410005 ， China (Cao YD); Nαtional Institute for Viral Disease Control and Prevention , Chinese Centerfor Disease Control αnd Prevention , Beijing 100050 , China (Duan Z J). Corresponding αuthor: Cao Youde , Emαil: youde 120 @ aliyun. com; Duαn Zhα句iun ， Emαil: zhαojund@ 126. com [Abstract 1 Objective To establish and evaluate a Metapneumovirus real-time quantitative reverse