内标实时荧光RT-PCR检测鸡新城疫病毒方法的建立.pdfVIP

.90 • Animal Husbandry Veterinary Medicine 2014 Vol. 46 No.7 内标实时荧光 RT-PCR 检测鸡新城疫病毒方法的建立 程帮照1 ，朱杰2 ，卢运战3 ，叶红飞1 ，王骏俊1 ，宋晓明1 ，余昌利3 (1.安徽省宣城市畜牧兽医局，安徽宣城 242α)(); 1 2. 安徽省宣城木子禽业专业合作社，安徽宣城 242 0; ∞ 3. 宣州区畜牧兽医局，安徽宣城 242仪则) 摘要:为了建立对鸡新城疫病毒 (NDV) 快速准确的检测方法，根据 NDV 基因序列特点，在全序列6997 到7092 之间的位点设计1 对特异性引 物和 1 条TaqMan 探针，通过对反应体系的优化，建立了鸡新城疫病毒实时荧光RT-PCR 快速检测方法，并且制备了参与提取和反应的监控内标， 有效地控制了假阴性结果。结果表明:该方法特异性强，对8 份已知病毒样本的检测结果中，特异性为 1ω%; 所建立的方法灵敏度高，能检出 O. 1 TCID /mL 的病毒液，比普通 RT-PCR 检测的灵敏度要高出 1∞倍;平行管检测和隔期检测其 Ct 值的变异系数分别在0.21 %ω0.83% 和 50 0.681毛-1. 47% 之间，结果无明显差异;采用所建立的方法对 132 份疑似临床样本进行检测的结果中，组织样本和双拭子样本检测的阳性率分别 为26.2% 和37.8% ，比新城疫普通 RT-PCR 的检出率分别高出 7.2 和5.6 个百分点，表明所建立的检测方法具有良好的实用性。 关键词:内标;鸡新城疫;荧光RT-PCR; 检测:灵敏度 中圄分类号: S858.31 文献标志码:A 文章编号: 0529-5130(2014)07-α)90-04 鸡新城疫是由新城疫病毒 (NDV) 引起的一种 快速准确的新城疫检测方法对该病的防控意义 重大[叫。 急性、败血型、高度接触性传染病，传播迅速快，主 核酸诊断技术是对鸡新城疫病毒进行确诊最有效 要引起种禽、蛋禽的产蛋下降和肉禽的死亡率增加， 的手段，目前多采用普通 RT-PCR 和荧光 RT-PCR 给养禽业造成严重的经济损失，国际兽医局将其归为 技术，普通 RT-PCR 方法虽能够对新城疫病毒进行 A 类传染病。 NDV 属于副蒙古病毒科、副蒙古病毒亚科、 腮腺炎病毒属，是一种含有囊膜的负链 RNA 病毒， 检测，但存在检测过程繁琐、易造成假阳性、假阴 性、污染严重等问题;实时荧光 RT-PCR 技术以重 根据毒株致病力的差别，可分为强毒力型、中等毒力 型以及弱毒力型[1-飞近年来，由于新城疫病毒株的 复性好、灵敏度高、特异性强、操作简单、所需时间 变异，免疫程序不科学或者疫苗使用不当等原因，使 短、元污染等优点被广泛应用于各种病原的快速检