《dna重组技术的基本工具》课件(选修3).pptVIP

专题1 基因工程 题图： 科技探索之路： 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.2 基因工程的基本操作程序 1.3 基因工程的应用 1.4 蛋白质工程的崛起 专题1 基因工程 DNA重组技术的基本工具 基因工程的基本操作程序 基因工程应用 蛋白质工程的崛起 治疗糖尿病特效药—— 基础理论和技术的发展催生了基因工程 20世纪中叶,基础理论取得了重大突破 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 技术发明使基因工程的实施成为可能 基因转移载体的发现 工具酶的发现 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 问题探讨： 苏云金芽孢杆菌含有一种可以 合成毒蛋白的基因。 让细菌的毒蛋白基因在棉花细 胞中表达，可培育出抵抗棉铃 虫害的抗虫棉。 想一想： 需要做哪些关键工作？ 思考Q: 1.在自然界中有一些生物的DNA可能 进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相 关的实例？ 2.单细胞生物并没有在进化中，为什么不会因外 源DNA的入侵而灭绝？有何保护机制？ ⒈主要来源： ⒉种类与命名： ⒊作用特点（特异性） 4.限制酶识别序列 5.作用结果： ⒉种类与命名： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种 限制性内切酶(限制酶)。 实例： 1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A.限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中少 B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 注意：这两条DNA分子的碱基对不是随意乱写的。 一、每个DNA分子上的两条链上的碱基要互补配对； 二、每个DNA分子中每条链都存在一个G-A-A-T-T-C的碱基序列，也就是说是EcoRI限制酶的识别序列，并存在G-A的切割位点。 小结： Ｂ Q:要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 Q:如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA连接酶可把切下来的DNA片段拼接成新的DNA。即:把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来实质是把脱氧核糖和磷酸连接起来. 二、 DNA连接酶----分子缝合针 ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 二、 DNA连接酶----分子缝合针 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 相同点 区别 DNA连接酶 DNA聚合酶 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 Q:外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？ 1.作用： 2.种类： 质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。 将外源基因送入受体细胞。 三、基因进入受体细胞的载体--分子运输车” 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒:常含有抗药基因如:四环素的标记基因。(质粒的存在与否对受体细胞生存没有决定性作用，但复制只能在受体细胞内完成) 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并且具有自我复制能力的双链环状DNA分子 质粒是基因工程最常用的载体 1.假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 2.作为载体没有切割位点将怎样？ 3.目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？ 4.如果载体对受体细胞有害将怎样？ 作为运载体必须具备的条件 作为运载体必须具备的条件 1.能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存。 2.具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因，便于进行筛选。 4.必需是安全的，不会对受体细胞有害。 注意： 真正用作运载体的质粒都是人工改造过的 质粒的特点： 1、细菌染色体外双链环状DNA分子