1分光光度分析.docVIP

仪器分析 张振华 日照职业技术学院水产学院 第章 分光光度分析 （1）目标 ①了解分光光度分析的原理和紫外-可见分光光度计的构造； ②掌握分光光度分析的特点、流程、最佳测定条件的选择、干扰的消除方法； ③掌握物质对光的选择吸收和吸收光谱曲线，摩尔吸收系数与吸收系数，吸光度与透光率，偏离郞伯比尔定律的原因；掌握显色反应条件及光度测量（分析）条件的选择； ④熟练使用紫外可见分光光度计、日常维护及常见故障排查。 （2） 物质对光的选择吸收和吸收光谱曲线，摩尔吸收系数偏离郞伯比尔定律的原因分光光度分析的特点、流程、最佳测定条件的选择、干扰的消除方法 显色反应条件及光度测量（分析）条件的选择紫外可见分光光度计、日常维护及常见故障排查 （3） 1.1 分光光度分析概述 .1.1朗伯-比尔定律 （1）物质对光的选择性吸收 分子中的电子总是处在某一种运动状态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。电子受到光、热、电等的激发时，将从一个能级转移到另一个能级，这种现象称为电子的跃迁。由于电子的能级是不连续的，因此，分子只能吸收那些能量相当于两个能级差值或其整数倍的辐射。不同波长的光能量不同，所以，某一特定分子只能选择性的吸收特定波长的光，这就是物质对光的选择性吸收。 （2）透射比和吸光度 当一束强度为I0的单色光垂直照射到某一均匀、非散射的吸收介质时（图-1），透射光强度变为It，则透射光强度与入射光强度之比称为透光率，用T表示，则有： 图 -1 单色光通过均匀介质 T=It / I0 （-1） 物质的透光率越大，表明物质对光的吸收越小；反之，透光率越小，表明物质对光的吸收越大。常用吸光度来表示物质对光的吸收程度，吸光度用A表示，A值越大，表示物质对光的吸收越大。计算公式为： A=lg I0/ It =﹣lg T （-2） 透光率和吸光度都是表示物质对光的吸收程度的一种度量。 分光光度法可以测定液体样品，也可以测定固体样品和气体样品，但一般都需要将样品制成溶液后测量。 （3）朗伯-比尔定律 朗伯-比尔定律是光吸收的基本定律，也是分光光度法进行定量分析的依据和基础。它是由朗伯（S.H.Lambert）和比尔（Beer）两定律联合而成，因此，又称朗伯-比尔定律。 1760年，朗伯研究发现，当用一束适当波长的平行单色光照射某一固定浓度的均匀透明溶液时，光的吸收程度与光透过的液层厚度成正比，此即为朗伯定律，其数学表达式为： A=k1l （-3） 式中：l—液层厚度（即样品的光程长度），cm； k1—比例常数，与入射光波长、溶液性质、浓度和温度有关。 朗伯定律适用于任何非散射的均匀介质，但是不能阐明吸光度与溶液浓度之间的关系。 1852年，比尔研究发现，当用一束适当波长的平行单色光照射厚度一定的均匀透明溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度成正比，此即为比尔定律，其数学表达式为： A =k2c （-4） 式中：c—溶液浓度，mol/L； k2—比例常数，与入射光波长、液层厚度、溶液性质和温度有关。 如果同时考虑溶液的浓度和液层厚度这两个因素，即溶液浓度和液层厚度两者同时变化时，溶液浓度和液层厚度都影响物质对光的吸收，且吸光度与二者的乘积成正比，此即为朗伯-比尔定律，即光吸收定律，其数学表达式为： A=Klc （-5） 式中：K—吸光系数，与入射光的波长、溶液的性质、温度等因素有关。 朗伯-比尔定律应用必须具备三个基本条件，分别为： （1）入射光必须是平行的单色光； （2）光吸收发生在均匀的介质中； （3）光吸收过程中，吸光物质互相不发生作用。 .1.2吸光度的加和性原理 在多组分的体系中，某一波长下，如果各种吸光物质之间没有相互作用，则体系在波长的总吸光度等于体系中各个组分吸光度之和，即吸光度具有加和性，称为吸光度加和性原理。其数学表达式为： A总= A1+ A2+ A3+…+ An......................................（-6） 式中，A1，A2，A3，…，An—体系中各组分1，2，3，…，n的吸光度。 吸光度的加和性原理对多组分同时测定的定量分析、校正干扰等都极为有用。 .1.3摩尔吸光