香豆素类化合物对大鼠成骨细胞的细胞生物活性影响的实验的分析研究.pdfVIP

中文摘要 香豆素类化合物对大鼠成骨细胞细胞生物活性 影响的实验研究 摘 要 0P)是以骨量减少，骨 目的：骨质疏松(osteoporosis 微观结构退化为特征致使骨脆性增加以及易于发生骨折的 一种全身性骨骼疾病。骨质疏松一般分为两大类：即原发性 骨质疏松和继发性骨质疏松。前者又分为：绝经后骨质疏松 (postmenopausal (senile 最常见类型。由于骨质疏松症引起的骨折等并发症，对人们 健康和生活造成的严重威胁，重视骨质疏松症及其骨折的防 治成为我们所面临的一项艰巨任务。 OP的发生是由骨代谢异常引起的，骨组织的代谢是一 个旧骨不断被吸收，新骨不断形成的周而复始的过程。正常成 熟骨的骨代谢主要以骨重建形式进行。骨重建的具体过程包 括以破骨细胞激活、骨吸收开始和与之相偶联的成骨细胞激 活、骨形成而终结。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负 责骨基质的合成、分泌和矿化，能表达多种骨相关基因，分 泌多种蛋白质和多肽，其数量和活性直接影响着骨代谢的平 衡。 成骨细胞产生的碱性磷酸酶(alkaline 在碱性条件下水解多种磷酸酯，并具有转磷酸基作用，有利 于骨的矿化，是成骨细胞分化早期的特异性指标，其活性反 映了成骨细胞的成骨活性。 ’ 中文摘要 Gla 成骨细胞分泌的骨钙素(boneprotein，BGP)是一 种非胶原蛋白，其主要功能是与羟磷灰石结合，促进骨的矿 化。是骨形成功能的良好标志物，被认为是成骨细胞分化晚 期即矿化期的标志。 成骨细胞表达雌激素受体(estrogenreceptor，ER)。 ER属核受体超家族成员，是一类由配体激活的转录因子， 介导大部分的雌激素反应。ER包括ER仅和ERp两种亚型。 研究证实大鼠成骨细胞同时表达ER仪和ERp。 雌激素可通过ER调节成骨细胞的生成和活性，对治疗 PMOP疗效肯定，但其长期应用的安全性令人担忧。植物雌 质，可有效预防绝经后骨质疏松，同时不伴有雌激素替代疗 法(estrogen replacementtherapy，ERT)的并发症，是目前 治疗骨质疏松药物的研究热点之一。 中医理论认为，肾主骨、生髓，骨质疏松症属于“骨痿、 “骨痹的范围，其发病的始动因素是肾精亏损。所以研究 抗骨质疏松药物多从补肾药物着手，而许多补肾中药中含有 植物雌激素。植物雌激素包括异黄酮类、木脂素类及香豆素 类三类化合物，补肾中药蛇床子和补骨脂中分别含有香豆素 类化合物蛇床子素和补骨脂素，其是否对骨质疏松有一定的 防治作用，是否可作为雌激素的替代药物? 本实验采用成骨细胞体外培养、分子生物学的技术和方 法，研究蛇床子素和补骨脂素对成骨细胞增殖、分化及ER 表达的影响，旨在寻求雌激素替代药物，并探讨其治疗骨质 疏松的机制。 中文摘要 方法： l成骨细胞的培养 用改良的组织块法分离培养新生(24h内)SD大鼠颅骨 成骨细胞。将不同浓度的蛇床子素和补骨脂素加入到成骨细 胞的培养基中。 2细胞形态学观察 每日通过倒置显微镜观察对照组和药物处理组细胞的 形态、生长状况之间的差别。 3利用噻唑兰(MTT)法检测对照组和各药物处理组的细胞 增殖。 4ALP比活性的测定 用对硝基苯二钠基质动力学法检测ALP活性的改变。比 活性用U／L表示。 5骨钙素的测定 骨钙素的测定采用放射性免疫法(ⅪA)，用丫计数器测 定每分钟放射性计数(CPM)。 6成骨细胞总IⅢA采用异硫氰酸胍一步法提取。 7mRNA表达的定量 的相对表达量。 结果： 1细胞形态学观察 药物处理组与对照组相比，细胞数量较密集，细胞间隙 少，形态无明显差异。 2蛇床子素及补骨脂素对成