薄层色谱法分离鉴定食品中的黄酮类化合物.docVIP

实验一 薄层色谱法分离鉴定食品中的黄酮类化合物 一 实验目的 通过卡玛薄层色谱仪分析食品中黄酮类化合物的实验，了解薄层色谱分离方法的原理及薄层色谱仪的大致结构；掌握使用薄层色谱仪的及其相关软件的方法。 二 实验原理 将黄酮类粗提物采用半自动上样法，借助于混合物中的组分，在互不相容的组分件进行吸附或分配，以达到分离的目的。 三 仪器与药品 瑞士卡玛（CAMAG，Switzerland）薄层色谱仪构造如下图所示（本实验室薄层色谱仪包含除6之外的所有部件）。色谱展开流动相为：氯仿:甲醇=9:1。 四 实验方法及操作步骤 1. 薄层板使用前先活化，如有特殊要求，还应预洗。 活化方法：将硅胶板移入烘箱，缓慢升温至105-110℃恒温活化半小时，取出放入干燥器中备用。 2. 点样 点样是平面色谱中最重要的步骤，点样过程中产生的误差无法通过色谱展开和计算来校正。本设备采用喷雾点样，条带状等多种方式点样。其中条带状点样适合中药分析。 3. 展开 展开式薄层色谱中受影响因素最多的步骤，展开剂的选择、不同展开方式、温度、展开距离对成分分离的影响。其中展开湿度的影响值得重视且较难控制。 本实验室使用的为全自动展开系统。 4. 色谱后衍生化 本实验室使用的薄层色谱仪器带热激发反应，可短时间内将展开板进行烘干。 5. 图谱记录和评价 该系统优点：曝光时间自动侦测、曝光时间课手动调节、专业图像增强—图像校正、专业图像增强—空白板背景扣除。 五 软件设定 导入 双击软件 设定参数 新建 1.点样器 2.展开器 3. 观察器 1. 点样器设置： 进入Linomat 5 General 界面 调整Sequence.defaults 进入Sequence界面（调整Number of tracks、Band length、点样位置x，y轴、样点间隔、点样量、点样顺序等等） 2. 展开器设置： 新建 进入界面设定参数（预饱和时间、预饱和液所需体积、展开剂体积、展开距离、吹干体积） 开始 提示加预报和液 加预饱和液过程中加展开剂 展开完毕，待吹干、取出、放入观察室 3. 观察设置： 新建 选择所需要用观察光，如“254nm，360nm，R，T，RT等等 点击将要观察所需的光照条件 点击开始拍照 拍照完成。 六 作业和思考题 展开剂的选择条件