吴茱萸碱对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用和机制.pdfVIP

吴茱萸碱对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制 专业临床检验诊断学 研究生于潇榕 导师蒋红梅教授，王豫萍教授 摘要 目的：了解吴茱萸碱对四氯化碳（Carbon tetrachloride，CCl ）诱导的 4 急性小鼠肝损伤的干预作用及其机制。方法：健康雄性昆明小鼠50 只，随机分 为5 组：正常组、模型组、吴茱萸碱低、高两个剂量预防组（分别予吴茱萸碱 15mg/kg、25mg/kg）及联苯双脂阳性药对照组（150mg/kg），每日 10ml/kg 灌 胃一次。第七天灌胃后1 小时，除正常组外，其余各组均用0.2%CCl -花生油溶 4 液（10ml/kg）灌胃，12 小时后留取全部血液及肝脏。肝组织进行病理学检查 （HE 染色），检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT） 和天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）水平；检测肝组 织匀浆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ，SOD)活性；免疫组织化学法 检测小鼠肝组织肿瘤坏死因子- α(Tumor Necrosis Factor- α,TNF- α）、白 细胞介素-1β（interleukin -1β，IL-1β)、信号传导及转录因子3 （Signal transducers and activators of transcription-3，STAT3）及p-STAT3 的表 达；TUNEL 法检测肝组织细胞凋亡；Real-time PCR 检测肝组织内白细胞介素-6 （interleukin -6,IL-6）、F4/80 和干扰素- γ（interferon- γ，IFN- γ）mRNA 水平；Western blot 方法检测STAT3 及p-STAT3 的蛋白表达。结果：与正常对 照组比较，模型组小鼠HE 染色有明显肝损伤（P0.05）、血清ALT、AST 水平 显著升高（P0.05）；与模型组比较，各干预组小鼠的HE 染色肝损伤明显较轻 （P0.05），血清ALT、AST 水平显著下降（P0.05），肝组织匀浆SOD 活性明 显升高（P0.05）；细胞凋亡数量明显减少（P0.05）；肝组织IL-6、F4/80、 IFN- γmRNA 和TNF- α、IL-6、p-STAT3 蛋白表达下降（P0.05）。结论：吴茱 萸碱对CCl4 诱导的小鼠急性肝损伤有一定的干预作用，其机制可能与吴茱萸碱 提高机体抗氧化应激能力，下调TNF- α、IFN- γ等炎症因子的释放、减少细胞 凋亡，抑制IL-6-STAT3 通路的活化有关。 关键词急性肝损伤；氧化应激；炎性因子；STAT3；吴茱萸碱 1 前言 肝损伤是由各种原因引起的肝脏病理损伤，由于人们的饮酒习惯、药物的 不规范使用和食品安全问题的频发等问题，肝损伤的发生屡见不鲜。肝损伤可 以继发肝纤维化、肝癌等更为严重的肝脏疾病。因此，如何有效的预防和治疗 肝损伤，已经成为国内外研究的焦点。 肝损伤的发生机制十分复杂：化学机制主要通过细胞色素P450及结合反应 产生的中间代谢产物产生损伤；免疫机制则通过细胞因子、一氧化氮、补体及 免疫变态反应等产生损伤[1-2] ；病理性细胞凋亡也属其中之一。氧化应激状态是 指来自分子氧的游离基或反应性氧化产物（ROS ）及其代谢的产物超过了机体 的防御或去毒能力。体内抗氧化损伤的防护系统有两大类：低分子自由基清除 剂及酶性清除剂。在氧化应激状态下，自由基过量过快生成，酶性清除剂SOD、 [3] CAT(catalase)等大量消耗 ，造成体内H O 、超氧阴离子自由基增加，最终造 ２ ２