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对紫外可见分光光度法的原理和应用的讨论 环境工程 阎正坤 摘要：紫外可见分光光度法是一种应用很广的方法。在学习其基本原理和仪器结构后，得到该分析方法是一种具有广谱适用性的分析方法。基于物质分子对紫外光区或可见光区有较强的吸收峰，即可进行定量、定性等分析；或反之对于在紫外光区和可见光区有较弱吸收峰的物质中含有某些在此光区有强吸收峰的杂质，可进行纯度分析或结构分析；原子态或离子态的金属、非金属物质，可通过在特定介质中与配合物反应，生成分子态的有色配合物，从而进行紫外可见分光光度法的分析。 关键词：紫外可见分光光度法 朗伯比尔定律 定性分析 定量分析 1引言 随着社会环保意识的增强，人们对环保工作越来越重视。石油化工企业，污水的分析与处理已经极大地影响着企业的发展和效益。其中污水含油是主要的一项。现在测试污水含油的常用仪器是紫外可见分光光度计。它已在化学、生物学、环境科学等科学研究领域和化工、医药、环境检测等现代生产与管理部门广泛应用。紫外可见分光光度计主要理论框架早已建立，制作技术相对成熟。分光光度法在分析领域中的应用也有数十年历史，至今仍是应用最广泛的分析方法之一。 2紫外可见分光光度计基本原理 紫外可见分光光度计是吸光光度法常用仪器。紫外可见吸光光度法是根据物质对紫外光和可见光选择性吸收而进行分析的方法。吸光光度法的理论基础是光的吸收定律———朗伯—比尔定律， 其数学表达式为 A=Kdc 朗伯—比尔定律的物理意义是，当一束平行单色光垂直通过某溶液时，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及液层厚度d成正比。当液层厚度d以cm、吸光物质浓度c以“mol·L-1”为单位时，系数K就以ε表示，称为摩尔吸收系数。此时朗伯—比尔定律表示为 A=εdc 式中摩尔吸收系数单位为L·mol-1·cm-1。 吸光光度法具有较高的灵敏度和一定的准确度，特别适宜于微量组分的测量。在污水中含油量一般较少，国家标准是不大于10mg/l。本法具有操作简便、快速、适用范围广等特点，在分析化学中占有重要的地位。 3紫外可见分光光度计的结构 3.1仪器结构 一束复合光通过分光系统，将其分成一系列波长的单色光，任意选取某一波长的光，根据被测物质对光的吸收强弱进行物质的测定分析，这种方法称为分光光度法。分光光度法所使用的仪器称为分光光度计。紫外可见分光光度计种类和型号较多，常用的有72型、721型、752型等。各种型号的分光光度计的基本结构都相同，由五部分组成：①光源(钨灯、卤钨灯、氢弧灯、氘灯、汞灯、氙灯、激光光源)；②单色器(滤光片、棱镜、光栅、全息栅)；③样品吸收池；④检测系统(光电池、光电管、光电信增管)；⑤信号指示系统(检流计、微安表、数字电压表、示波器、微处理机显像管)。 单色器是将来自光源的混合光分解为单色光，并提供所需波长的光，是仪器的关键部件。它是由入口与出口狭缝、色散元件和准直镜等组成，其中色散元件是关键性元件，主要有棱镜和光栅两类。 3.1.1棱镜单色器 光线通过一个顶角为θ的棱镜，从AC方向射向棱镜，如图1所示，在C点发生折射。光线经过折射后在棱镜中沿CD方向到达棱镜的另一个界面上，在D点又一次发生折射，最后在空气中DB方向行进。 图1 棱镜的折射 光线经过此棱镜后，传播方向从AA′变为BB′，两方向的夹角δ称为偏向角。偏向角与棱镜的顶角θ、棱镜材料的折射率以及入射角i有关。如果平行的入射光由λ1，λ2，λ3三色光组成，且λ1λ2λ3，通过棱镜后，就分成三束不同方向的光，且偏向角不同。波长越短、偏向角越大，如图2所示，δ1δ2δ3。这即为棱镜的分光作用，又称光的色散。棱镜分光器就是根据此原理设计的。 图2 不同波长的光在棱镜中的色散 棱镜是分光的主要元件之一，一般是三角柱体。由于其构成材料不同，透光范围也就不同。比如，用玻璃棱镜可得到可见光谱用石英棱镜可得到可见及紫外光谱，用溴化钾(或氯化钠)棱镜可得到红外光谱等。棱镜单色器示意图如图3所示。 图3 棱镜单色器示意图 1-入射狭缝；2-准直透镜；3-色散元件；4-聚焦透镜；5-焦面；6-出射狭缝 3.1.2光栅单色器 单色器还可以用光栅作为色散元件，反射光栅是由磨平的金属表面上刻划许多平行的、等距离的槽构成。辐射由每一刻槽反射，反射光束之间的干涉造成色散。 3.1.3 721型和752型分光光度计的原理和结构 Ⅰ、721型分光光度计 721型分光光度计是可见光分光光度计，是72型分光光度计的改进型，适用波长范围368nm~800nm，主要用作物质定量分析。它由磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计组成。其内部构造和光路系统如图4和图5。 图4 721型分光光度计内部结构图 1-光源；2-单色光器；3-比色皿槽；4-光量调节器； 5-光电管暗盒部件；6-微安表；7-稳压电