离体家兔主动脉环实验实验设计.docVIP

离体兔主动脉环实验 07临床 曲宁 目的 学习离体器官组织灌流的方法，掌握兔主动脉环制备技术，观察维拉帕米对电压门控通道的阻断作用及酚妥拉明对配体门控钙通道的阻断作用。 原理 高浓度的氯化钾液（60～100mmo1）可使血管平滑肌细胞去极化，促使电压门控钙通道开放，引起胞外Ca2+内流，导致血管平滑肌收缩。能阻断高钾液此作用的药物则为电压门控钙通道阻断药。 α受体激动药（如苯肾上腺素）诱导血管收缩是由α1肾上腺素受体的激活造成的，主要通过激活磷脂酶C，产生甘油二脂和三磷酸肌醇（IP3），主要由IP3诱导肌浆网内的Ca2+释放而致血管环（条）收缩，α受体阻断药可阻断此作用。当NE与血管平滑肌细胞α受体结合，可导致血管平滑肌收缩；与?受体结合则导致血管平滑肌舒张。NE与α受体结合能力较与可根据剂量调整在一定范提高疗效pA2）以确定该阻断药的阻断效价 酚妥拉明(Phentolamine)为短效α-受体阻滞剂，与去甲肾上腺素能神经递质和拟肾上腺素药竞争 α-受体而发挥阻滞作用。对α1 和 α2受体都有阻滞作用，能直接松弛动静脉平滑肌 维拉帕米为Ca离子通道阻滞剂5g张力换能器，微机生物信号采集处理仪，手术剪刀，眼科剪，眼科镊，培养皿，烧杯，100(l、1m1移液器，棉线； 3． 实验药品 3mo1/L氯化钾，10-5mo1/L维拉帕米，10-3mo1/L肾上腺素，10g/L酚妥拉明，1mmol/L乙酰胆碱，Krebs液，95%O2+5%CO2混合气体. 四、实验步骤 1、实验系统连接和仪器参数设置 （1）实验装置连接 按下图连接装置。将张力换能器固定于微距调节器上，换能器输出线接微机生物信号处理系统输入通道。麦氏浴槽中充以Krebs台氏液至固定水平面，调节超级恒温器的温度至37℃，保证麦氏浴槽内37(0.5℃恒温，通气管接气瓶（95%O2+5%CO2）管道。调节通气管气流量，通气速度以麦氏浴槽中的气泡一个个逸出为宜。 2、仪器参数设置 （1）RM640系统仪器参数：张力换能器输入通道模式为张力，时间常数为直流，滤波频率10Hz,灵敏度3g，采样频率100Hz,扫描速度25s/div. （2）PcLab和MedLab系统仪器参数：张力换能器输入通道信号名称为张力，放大倍数200~500、直流耦合、上限频率10Hz,采样间隔5ms. 图11-27-1 血管灌流示意图 用Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值，间隔30分钟进行下一项目，每隔15分钟换液一次。 3、实验方法 （1）用钝器击晕兔子后 ，剪开胸腔，迅速取出心脏及胸主动脉放入盛有4℃的混合气体饱和的Krebs营养液的培养皿中，连续用混合气体充气。分离出主动脉，将血管内的残存血液冲洗干净，小心剥去外围的结缔组织，将主动脉弓以下的胸主动脉剪成4mm长的动脉环数段备用。 （2）需要保存内皮的血管，动作应轻柔。如需无内皮的血管环，可用棉签或牙签将血管内皮轻轻檫去。 （3）将血管环固定悬挂于盛有10ml Krebs液的麦氏浴槽内，将固定杆上的不锈钢钩轻轻穿入血管环一侧，并将另一端连接有细线的系于张力换能器上，通入混合气体，调节通气量至一个一个小气泡逸出为好。浴槽内温度应保持37(0.5℃。 （4）血管环的初始张力前15分钟为1.5g，15分钟后调至2.4g，并以此张力平衡45分钟。每隔15分钟换液一次。 （5）用终浓度60mmol/L KCL（3mol/L KCL 200(l）收缩血管环，待收缩稳定后用预热的Krebs洗脱，反复冲洗直至张力恢复到初始值为止；重复加入同一浓度KCL，连续3次，用Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值。 （6）用10-3mol/L的肾上腺素100(l（终浓度10-6mol）诱发血管收缩达稳定后，加入10-3mol的乙酰胆碱100(l（终浓度10-6M），观察血管的松弛效应是否超过10%，如果≥10%则为内皮完整，否则为内皮受损或无内皮。(血管内皮细胞的完整对血管平滑肌舒宿起调节作用 按以下顺序把药物加于浴槽中： 1． 加入3mo1／L氯化钾100(1，观察并记录动脉环的收缩。Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值。 2. 加入10-5mo1／L维拉帕米200(1，15min后再加入3mo1/L氯化钾200(l。记录动脉环收缩，在收缩达高峰后用Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值。 3. 加入3mo1／L氯化钾100(1，待曲线上升期间迅速加入维拉帕米，观察曲线变化情况。曲线平稳后用Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值。 4． 加入10-3mo1/L肾上腺素100(1，记录动脉环的收缩，在反应达高峰时用Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值 5． 20min后，加入10g/L酚妥拉明100(l，10min后再重复观察项目