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复制子:复制起始位点及其所启动复制DNA构成的完整功能单位
2.1复制子:复制起始位点及其所启动复制DNA构成的完整功能单位.
2.2启动子(Promoter):提供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列.
2.3质粒的相关概念
严谨型质粒:质粒(如pSC101)的复制依赖于宿主细胞提供的蛋白和质粒自身编码的蛋白的共同作用.
松弛型质粒:质粒(如pUC系列)的复制并不需要质粒编码的功能蛋白,而是完全依赖于由宿主提供的半衰期较长的酶,当蛋白的合成停止时,复制仍然进行.
拷贝数:质粒在细胞内存在的数量
2.4限制性核酸内切酶(Restriction endonuclease):是一类能识别双链DNA中特定核苷酸序列,并使每条链的一个二磷脂键断裂的内脱氧核糖核苷酸酶.
2.5同裂酶:来源不同,但具有相同识别序列的限制酶.
同位酶:具有相同的识别序列,但酶切位点不同的限制性内切酶.
同尾酶:具有不同识别序列的限制性内切酶,切割DNA分子后产生相同的粘性末端
2.6 5’ 粘性末端:限制性内切酶在二重对称轴的5’端切割DNA分子的每一条链,使得双链DNA分子交错断开,产生带突出的5’粘性末端的DNA片段.
3’粘性末端:限制性内切酶在二重对称轴的3’端切割DNA分子的每一条链,使得双链DNA分子交错断开,产生带突出的3’粘性末端的DNA片段.
平末端:限制性内切酶在二重对称轴的上切割DNA分子的每一条链,使得双链DNA分子断开,产生平末端的DNA片段。
2.7聚合酶:是一类催化DNA或RNA合成的酶类,酶的作用需要DNA作为模板,合成的DNA或RNA链的序列与模板的序列互补,大多数聚合酶优先作用于DNA模板,但也可以作用于RNA,只是效率较低.
2.8PCR (polymerase chain reaction,聚合酶链式反应):在细胞外模拟DNA复制过程,在DNA合成酶的作用下,模板DNA分子经变性、退火和延伸的过程合成新的DNA分子,从而达到在短时间内复制大量特异性DNA片段.
2.9侧面序列:当识别序列两侧的碱基序列达到一定的长度时,限制性内切酶才能正常切割DNA分子的现象.
2.10位点偏爱:DNA分子中的某些识别序列能够迅速被限制性内切酶切割,而另一些位点则相对不易被切割的现象.
3.1质粒上的相关基因
. A)COP因子:决定质粒的拷贝数,在质粒的复制过程中指令细胞合成阻物,当质粒复制到一定的拷贝时,阻物的量也积累到足以阻止质粒的复制.------copy
B)Rep基因:在质粒的复制过程中,Replication基因会指令宿主细胞合成一种调节蛋白,促进质粒的复制.
C)Inc基因:决定两种亲缘关系相近的两种质粒不能存在于同一宿主细胞中.--- incompatible
D)Tra基因:指令宿主细胞合成菌毛(Pilus)和细胞表面物,促使宿主细胞与受体细胞表面结合,遗传物质的转移.
E)抗性基因:抗菌素抗性基因,Apr,Tcr.
F)产毒素基因:大肠杆菌素基因(Col-质粒).
G)降解基因:降解重金属、有机物和农药等.
H) 致瘤基因:诱导某些组织形成肿瘤,如Ti质粒,Ri质粒.
3.2双向载体:由两个以上的质粒构建而成. 将Ti质粒的Vir与广宿主范围质粒的携带目的基因 (MCS)、选择性标记、转移和复制功能整合在一起.双向载体可在大肠杆菌和农杆菌中进行复制并稳定存在下去.
4.1目的基因:决定生物的某些性状、具有应用价值或应用前景,并被用于构建物种新特性的基因。
4.2基因结构:包括从5’端mRNA转录位点开始到3’端mRNA转录终止信号结束的全部功能单位。这些功能单位包括:转录启动区、核糖体识别和结合区、编码区(起始密码,开读框、终止密码)、转录终止区。
4.3操纵子(Operon):功能密切相关的基因聚集在一起,处于同一个转录启动区的调控
之下,并具有相同的转录终止区.
4.4SD序列:核糖体识别和结合的序列,通常位于起译密码子上游4-9bp处。序列特征为:AGGAGG, 它与核糖体核糖体16S rRNA的3‘序列3’ UCCUCC 5’互补配对,从而使核糖体与mRNA结合,启动翻译过程。
4.5终止子:原核生物基因在转录终止前的一段提供转录终止信号的DNA序列(Terminator).
a)不依赖于终止因子的终止子(简单终止子)
含有寡聚T序列和一段富含GC的序列
b)依赖于终止因子(()的终止子.
不含寡聚T序列,回文结构不含富GC的序列
终止因子:帮助RNA聚合酶识别终止信号的辅助因子(Termination factor)
4.6重叠基因
一个基因内包含另一个基因的现象
a)部分重叠 :两个基因的序列部分重叠
b)完全重叠:一个基因完全包含在另一个基因内
4.7假基因
一种核苷酸序列同其相
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