腺苷A1和A2a受体%3a在体外糖氧剥夺条件下%2c对反应性胶质化得作用有和机制.pdf

腺苷Al与A2a受体： 在体外糖氧剥夺条件下，对反应性胶质化的作用与机制 中文摘要 前言 反应性胶质化的主要表现为星形胶质增生和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达 增加。它是中枢神经系统中各种脑损伤后的修复反应，但过度的胶质化反应将形 成胶质瘢痕进而影响神经修复和轴突再生。因此，研究胶质化的调控以减少胶质 化反应的负面影响显得尤为重要。 A3)中的最主要的2种亚型，它们作用于星形胶质细胞后可产生不同效应：A1R 拮抗剂可部分抑制御rP对胶质化反应的诱导作用，提示AlR可能抑制反应性胶 质化；而在A2出的相关研究中发现，A2水基因敲除小鼠的GFAP表达减少； A2水拮抗剂Sch58261可部分逆转bFGF对胶质化反应的诱导作用。这些体内外 研究提示A2水可能诱导反应性胶质化，具有与A1R相拮抗的作用。缺血缺氧 损伤后，AlR与A2出是否参与胶质化?其机制如何?此外，体内外研究证实， 在中枢神经系统(CNS)中AlR与A2aR可产生相互拮抗的生物学作用，如脑缺血 后AlR具有神经保护作用，而A2出对神经修复具有损伤作用。那么在缺血缺 氧后的反应性胶质化中，二者是否可产生相互拮抗的作用?二者是否存在相互作 用?均尚未见报道。 为了探讨上述问题，本课题通过星形胶质细胞的糖氧剥夺建立体外缺血缺氧 模型，采用WbStemb10t、基因转染以及免疫共沉淀等实验方法，观察A1R与 A2aR在缺血缺氧／再灌条件下对反应性胶质化的影响，并探讨与之相关的信号 通路。此外，本课题还初步探讨了A1R与A2出之间的相互作用及其相关的信 号通路，以期能够为反应性胶质化的调控及其机制提供实验依据。 2 第一部分腺苷A1受体在反应性胶质化中的作用及其机制 目的研究体外糖氧剥夺后A1R在反应性胶质化中的作用及其相关的信号通路 方法培养大鼠星形胶质细胞系RBA-2细胞，以GFAP表达作为胶质化反应的 生物学标志；采用W，estem 糖氧剥夺基础后对GFm，表达影响，并用W，estemblot方法初步探讨Ah以及 Jak2／SB玎3信号通路的改变。 并逆转CPA对p．Jal【2的抑制作用。 信号通路间存在c∞s砌k。 第二部分腺苷A2a受体在反应性胶质化中的作用及其机制 目的研究体外糖氧剥夺后，A2承在反应性胶质化中的作用及相关的信号通路 (Akt／NF．心)。 和细胞周期；用wbstem 断心后，Sch5826l对GFAP表达、细胞周期以及NF．1出信号通路的影响。 结果W色stem blot和FACS结果显示，在常氧和糖氧剥夺条件下A2出转染均 可使GFAP表达上调以及S期细胞比例增加，该作用在糖氧剥夺后更明显。A2状 3 剂量依赖性上调p_脂水平；阻断地可逆转Sch58261对咄蛋白表达和细 胞周期的影响。Wbstem I心“I出a比值减小，魅抑制 但上调胞核中P65水平，且A2甜细胞胞浆中p 剂可逆转Scll5826l对P65和p_I心∥I小a的影响。 小结糖氧剥夺后，A2抿通过Akt去磷酸化诱导胶质化反应，该过程与P65蛋 白的核转位有关，而后者受pIlcB∥11出Q比值调控。 第三部分腺苷A1与A2a受体之间的相互作用及其相关的信号通路 目的研究体外糖氧剥夺后，A1R与A2出之间的相互作用，并对该作用所涉及 的信号通路进行初步探讨。 方法培养A2时细胞，采用免疫共沉淀的方法，定性检测A1R与A2出间的 相互作用；采用Wbstemblot方法，检测糖氧剥夺后AlR拮抗剂DPCPX对A2出 以及GFAP表达的影响并初步探讨该作用所涉及的信号通路(Jal(2、脂)。 结果 示糖氧剥夺后，AlR拮抗剂DPCPX呈剂量依赖性上调A2水以及GFAP蛋白表 达；DPCPX还可抑制A2耐细胞中p-地以及phI【2水平。 小结心与Jal【2信号分子可能参与调节A1R与A2出间存在相互作用。 4 结论 调p—Jal(2。 提示脂可能通过pJa