高三生物-IA3.1.1、2工具酶的发现和基因工程的诞生-基因工程的原理和技术复习课件-浙科版（浙江专用）.pptVIP

【例证2】(2010·江苏高考改造)下表中列出了几种限制性核酸内切酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制性核酸内切酶的酶切位点。请回答下列问题： (1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有_____个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越_____。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是_____。 (4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制性核酸内切酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_____酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了__________。 【解题关键】熟悉基因工程的基本步骤是解题的关键：(1)DNA分子是双链结构，质粒切割前是环状，无游离磷酸基团，切割后露出两个末端，有2个游离磷酸基团。 (2)限制性核酸内切酶切割时最好不破坏载体中的抗性基因。 (3)目的基因与质粒连接时，有3种连接可能，所以要筛选符合要求的重组载体。用两种限制性核酸内切酶切割时,因形成的末端不同,只有1种连接可能。 【精讲精析】(1)该质粒为环状DNA，经SmaⅠ切割前，不含有游离的磷酸基团，经SmaⅠ切割后形成的末端含有2个游离的磷酸基团。 (2)SmaⅠ识别的是CCCGGG序列，切割位点在C与G之间，SmaⅠ酶切位点越多，也就是C—G碱基对越多，C与G之间的氢键(3个)比A与T之间的氢键(2个)数量多，其含量越多，质粒的热稳定性越高。 (3)据图1可知，SmaⅠ切割位点在抗生素抗性基因(标记基因)中，据图2可知，SmaⅠ切割位点在目的基因中，因此使用SmaⅠ切割会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因。 (4)用同一种限制性核酸内切酶处理质粒和外源DNA，再用DNA连接酶连接时，往往会有三种连接形式：目的基因—质粒、目的基因—目的基因(环化)、质粒—质粒(环化)，后两种是我们不需要的，因而要进行筛选。用两种限制性核酸内切酶处理质粒和外源DNA，因形成的末端不同可避免上述情况的发生。 (5)连接质粒与目的基因的工具酶是DNA连接酶。 (6)抗生素抗性基因是标记基因的一种，标记基因的作用是供鉴定和筛选含有目的基因的受体细胞。 答案: (1)0、2 (2)高 (3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 (4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 (5)DNA连接 (6)鉴定和筛选含有目的基因的受体细胞 【互动探究】(1)在题中第(5)小题操作后，为选择导入重组载体的受体细胞，在培养基中应加入什么物质？该物质起什么作用？ 抗生素；选择。 (2)质粒除了题中体现的特点外，还应具有哪些特点？ 能在宿主细胞中复制和保存，具有多个限制性酶切位点。 1.(2010·浙江高考)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B.用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C.将重组DNA分子导入烟草原生质体 D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 【解析】选A。限制性核酸内切酶用来切割获取抗除草剂基因片段，而非烟草花叶病毒的核酸(RNA)，A错；DNA连接酶可以将获取的目的基因和载体结合，构建基因的表达载体，B正确；可以将获取的重组DNA分子导入到烟草受体细胞中，目的基因会在其中表达，使烟草具备抗除草剂的特性，欲筛选出抗除草剂的转基因烟草，可以将烟草放在含除草剂的培养基中培养，观察其是否能够正常生长，C、D正确。 2.(2011·天台模拟)下列关于基因工程及其应用的叙述正确的是( ) A.若要生产转基因抗病水稻，可先将目的基因导入大肠杆菌中，再转入水稻细胞 B.用氨基酸序列推测合成的目的基因与原基因的编码区一致 C.用DNA探针能检测饮用水中重金属物质的含量 D.作为载体要有多种限制性核酸内切酶的切点,但对一种限制性核酸内切酶而言,最好只有一个切点 【解析】选D。基因工程中受体细胞为植物细胞时，可采用土壤农杆菌转化法，先将目的基因导入土壤农杆菌中，再转入水稻细胞。由于某些氨基酸对应多种密码子，因而可能导致目的基因与原基因编码区序列上的差异；对于真核生物基因人工合成的目的基因都是能编码蛋白质的序列，而原基因的编码区有非编码序列(内含子)。DNA探针可以检测基因，如饮用水中的某种病毒，但不能检测物质含量。 3.(2011·杭州模拟)如图a表示基因工程中经常选用的载体——pBR322质粒，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中