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稻曲病菌 V-2 菌株细菌人工染色体文库构建及分析
微生物学通报 Sep. 20, 2013, 40(9): 1715−1722
Microbiology China © 2013 by Institute of Microbiology, CAS
tongbao@
生物实验室
稻曲病菌UV-2 菌株细菌人工染色体文库构建及分析
1 1 1 2 3 1*
刘庆丽 王晓明 王革娇 罗朝喜 谭新球 罗美中
(1. 华中农业大学 生命科学技术学院 湖北 武汉 430070)
(2. 华中农业大学 植物科学技术学院 湖北 武汉 430070)
(3. 湖南省农业科学院植物保护研究所 湖南 长沙 410125)
摘 要: 【目的】稻曲病(Rice false smut)是由稻曲病菌[Villosiclava virens (Cooke) Tak.] 引
起的严重危害水稻的真菌病害。构建稻曲病菌 UV-2 的大片段 DNA 细菌人工染色体
(Bacterial artificial chromosome, BAC)文库, 为致病相关基因的鉴定及在图位克隆、比较基
因组学等方面的研究奠定基础。【方法】以幼嫩菌丝为材料制备大分子基因组DNA 包埋
块, 用Hind III 部分酶解后经脉冲凝胶电泳筛选, 回收大片段DNA 并与pIndigoBAC536-S
载体连接, 连接产物转化大肠杆菌菌株 DH10B T1 Phage-Resistant 细胞后进行蓝白斑筛
选, 白色菌落捡入384 孔板置于−80 °C 低温保存。【结果】成功构建UV-2 菌株的高质量、
高覆盖度的BAC 文库, 该文库共含 10 368 个克隆, 平均插入片段为 124.4 kb, 空载率小
于1%, 约覆盖该菌基因组的36.8 倍。【结论】克服了真菌大分子基因组DNA 制备难控制
的技术难题, 建立了首个稻曲病菌的BAC 文库。该文库已作为一种公共基因组资源向研
究者开放(http://GR)。
关键词: 大分子DNA, 细菌人工染色体, 水稻, 稻曲病, 稻曲病菌
基金项目：农业部公益性行业专项项目 (No. 200903039-3)
*通讯作者：Tel: 86-27 : mzluo@
收稿日期：2012-11-13; 接受日期：2013-01-06
1716 微生物学通报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.9
Construction of a bacterial artificial chromosome library of
Villosiclava virens UV-2 genome
LIU Qing-Li1 WANG Xiao-Ming 1 WANG Ge-Jiao 1 LUO Chao-Xi2
TAN Xin-Qiu3 LUO Mei-Zhong 1*
(1. College of Life Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan,
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