反义寡核苷酸在肿瘤治疗中应用.doc

反义寡核苷酸在肿瘤治疗中应用【关键词】反义寡核苷酸;肿瘤治疗? doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.08.051文章编号:1006-1959(2010)-08-2030-02 肿瘤(tumor)的发病率很高,每年因患肿瘤而死亡的病人人数仅次于患心血管病引起的死亡人数,是人类疾病中危害人类生命的第二大杀手。癌症患者的死亡率极高,常规疗法并不能完全解决问题。随着分子生物学技术和遗传工程的不断发展,基因治疗在许多难治性疾病的应用研究中取得了令人鼓舞的成果。其中,反义基因治疗作为一种可特异性阻断或调节致病基因表达的技术手段,二十余年来不断发展、完善,在多学科疾病的治疗方面显示了广阔的发展前景。有关肿瘤基因治疗的研究已经成为热点。由于基因疗法的突出优点,使之具有不可替代的应用前景,基因治疗将开辟人类征服癌症及其它疑难病症的新时代。本文拟就c-myc反义寡核苷酸技术及其用于肿瘤治疗研究进展作一简要回顾。? 1.反义寡核苷酸治疗的概念及其作用机制? 反义寡核苷酸是一类经人工合成或构建的反义表达载体,表达的寡核苷酸片段,长度多为15-30个核苷酸,通过碱基互补原理,结合目的基因或mRNA上特定的序列(靶核酸),从而调节细胞的生长、分化等达到基因控制和治疗目的??[1]?。反义基因治疗的作用机制包括:1、以DNA为靶分子,反义药物的特异性序列与DNA双螺旋结构中的互补序列结合,形成三链结构,在基因转录或复制水平阻断或调节基因的表达;2、以mRNA为靶分子,反义药物特异性地与mRNA结合,形成双链结构,使其无法正常剪切、阻断翻译过程、激活细胞内源性核糖核酸酶、加速异常双链结构的消化降解,在剪切或翻译水平阻断或调节基因的表达。根据结合部位的不同分为反义DNA 、反义RNA 、核酶,但最常用的为反义寡脱氧核苷酸(反义DNA),是被首先发现的能够在体外培养的细胞内有效抑制Rous肉瘤病毒复制的反义药物??[2]?,这是科学家第一次使用反义核酸试验并取得成功。? 2.细胞对反义寡苷核摄取的因素? 影响细胞对反义寡核苷酸摄取的因素有很多如反义寡核苷酸的长度、总离子数、亲水性、亲脂性及浓度等。在细胞培养中,反义寡核苷酸常通过两种方法被细胞摄取:①利用显微注射法将反义寡核苷酸注入细胞。所以提高反义寡核苷酸与靶细胞结合方式的研究仍是目前研究的重点。②直接将反义寡核苷酸加入培养基通过载体而被细胞摄取,已被广泛运用。运用输送载体主要有:凝胶、聚赖氨酸、脂质体等。载体系统影响反义寡核苷酸治疗药物的因素是细胞膜对这些化合物的低通透性。因为它们的作用位点在细胞质或细胞核,所以药物穿透进人细胞是必要的。虽然反义寡核苷酸可被细胞吞饮,但在体内吸收的程度不足以支撑活性。因此,载体系统必须设计成保护反义结构抗降解,提高对细胞膜的穿透。载体系统分为病毒和非病毒载体,病毒载体包括逆转录病毒、腺病毒、单纯疙疹病毒等。非病毒载体包括脂质体、树突三聚体、蜗牛壳等等。目前研究和应用较多的是脂质体,尤其是阳离子脂质体更具有优越性??[4]?。? 3.反义寡核苷酸的毒副作用? 反义核寡核苷酸的细胞毒作用与核酸的化学修饰基因、序列长度及作用浓度和时间有关。一般而言,核酸序列愈长、作用强度愈大、时间愈久,毒性作用愈大。有关反义寡核苷酸在体内的毒性研究较少,静脉或腹腔注射硫代磷酸反义寡核苷酸后,在体内迅速再分布,T??I/2?10-60分钟,主要经过尿液排泄??[5]?,清除时间较长,约20-40小时。这表明可以不必大量反复用药即可使靶组织中具有一定治疗浓度的反义寡核苷酸??[5]?。然而,反义寡核苷酸可在如心、胃、肠等脏器中明显聚集??[6]?,这些非靶器官中集聚的反义寡核苷酸可产生非特异性地蛋白合成抑制作用,尤其是对骨髓和小肠等增生旺盛的器官:同时寡核苷酸降解后剩余的化学修饰碱基有掺合入DNA而引起突变或干扰DNA修复的可能。而局部应用反义寡核苷酸可明显减少其对远处组织的毒性作用??[7]?。? 4.反义基因治疗的优势与不足? 反义基因治疗具有明显的优势:①反义药物是与靶序列互补配对的片段,因此具有较高的特异性;②片段较短,合成方便、经济;③多种体外及体内实验证实反义药物可有效阻断或调节靶基因的表达;④反义寡核苷酸进入细胞内与细胞周期无关,既可进入增殖期细胞又可进入非增殖期细胞;⑤反义寡核苷酸不含病毒序列,不会产生免疫反应,也不会整合入宿主染色体内;⑥作用于局部,极少产生严重的毒副反应。虽然反义技术近年来飞速发展,但是仍然存在着一些不足之处:①对与疾病直接相关的靶基因了解不够,特别是绝大多数多基因疾病的致病基因还有待阐明,这将取决于人类基因组计划、功能基因组学的发展和完善;②基因导入效率、基因表达的时间与程