免疫组化操作规程-上海闪晶分子生物科技有限公司.PDF

免疫组化操作规程 一 仪器设备 1 18cm 不锈钢高压锅和电炉 2 医用微波炉 3 水浴箱; 4 冰箱 -18 -4 5 湿盒 6 耐高温塑料切片架 7 可调微 量移液器 8 定时器 9 pH 计 二 试剂 1 PBS(磷酸盐缓冲液 pH7.2 7.4) NaCl 137mmol/L KCl 2.7mmol/L Na HPO 4.3mmol/L KH PO 1.4mmol/L 2 4 2 4 2 柠檬酸盐缓冲液 CB pH6.0 0.01mol/L 1000ml 配制 柠檬酸三钠 3g 柠檬酸 0.4g 3 酶消化液 a 0.1%胰蛋白酶液 用 0.1%CaCl2(pH7.8) 配 制 b 0.4%胃蛋白酶液 用0.1N 的HCl 配制 三 操作流程 1 脱蜡和水化 脱蜡前 将组织芯片放在60 恒温箱中烘烤30 分钟 1 置于二甲苯I 中浸泡 10 分钟 在二甲苯II 中再浸泡 10 分钟 2 无水乙醇I 中浸泡5 分钟 在无水乙醇II 中再浸泡5 分钟 3 95%乙醇中浸泡5 分钟 4 85%乙醇中浸泡5 分钟 5 70%乙醇中浸泡5 分钟 6 蒸馏水中浸泡5 分钟 2 抗原修复 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片 1 抗原热修复 A 高温高压热修复 取一定量的0.01M 柠檬酸盐缓冲液 pH6.0 于压力锅中 大火加热至沸腾 将脱蜡水化后的组织芯片置于耐 放入已沸腾的缓冲液中 盖上锅盖 扣上压 高温塑料切片架上 1-2 分钟后 继续加热至喷气 从喷气开始计时 压力锅离 力阀 开热源 冷却至室温 取出玻片 先用蒸馏水洗两次后用PBS 洗 5 分钟 B 微波热修复 取一定量的0.01M 柠檬酸盐缓冲液 pH6.0 于微波 微波加热至沸腾 将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑 盒中 料切片架上 放入已沸腾的缓冲液中 中高档继续处理 10-15 分 取出微波盒冷却至室温 取出玻片 先用蒸馏水洗两次后用 钟 PBS 洗5 分钟 C 酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液 胰蛋白酶 使用前预热至 37 切片也预热至 37 消化时间约为 5~30 分钟 胃蛋白酶消化37 时间为 10-30 分钟 3 免疫组织化学染色 SP 法 1 脱蜡 水化 2 蒸馏水中5 分钟 3 用蒸馏水或PBS 配置新鲜的3%H2O2 室温封闭 10 分钟 蒸馏水洗 1 次 4 抗原修复 5 PBS 洗5 分钟 6 滴加正常山羊血清封闭液,室温 10