利用高分离度Q-TOF数据及Mass-MetaSite软件简化代谢物-Agilent.PDF

利用高分离度 Q-TOF 数据及 Mass-MetaSite 软件 简化代谢物鉴定工作流程 应用简报 作者 摘要 Ismael Zamora 和 Gabriele Cruciani 本应用简报概述了采用Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统及Agilent 6530 精确质量数 Molecular Discovery 公司 四极杆 飞行时间液质联用 系统对一种药物的代谢物进行分离和质谱分 - (Q-TOF LC/MS) Pinner, UK 析。将Agilent MassHunter 文件导入 Mass-MetaSite 后，即可应用 Mass-MetaSite 进行代谢物鉴定。最后， 可用作自动化数据库和报告系统，简化代谢物 WebMetabase 的鉴定过程。 前言 高分辨率精确质量数 Q-TOF 数据的出现颠覆了代谢物鉴定领域的传统思路。对于每个色 谱峰，专家们可生成大量的精确数据，用以指定代谢物的化学结构。因此，必须使用专 业的数据处理软件将大量的数据转换为能够有效共享的信息。 本应用简报将通过示例阐述如何应用 Mass-MetaSite 结合Agilent MassHunter 文件格 式鉴定色谱图中药物相关物质的色谱峰、指定图中每个色谱峰的化学结构、建立碎裂分 析数据库，以及在药物开发过程中与其他团队成员共享分析结果。 实验部分 代谢物样品 数据相关MS/MS 设备 代谢物样品制备：首先加入0.1 M pH 值为 本实验对两个化合物进行了分析，获得三 7.4 的磷酸盐缓冲液 （对于HLM，在1.4 mL 张MS/MS 谱图，排除时间为0.25 分钟。 • Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统， 试管中加入234 µL ，对于重组酶，则加入 配有Agilent 1290 Infinity 二元泵 215 µL）。然后，在试管中加入 6.3 µL 在正离子模式下应用安捷伦喷射流技术， • 安捷伦 1290 Infinity 自动进样器 HLM 或25 µL 重组酶制剂。加入 5 µL 的 并应用参比质量数溶液。质量数列表由 样品溶液 （溶剂为乙腈水）后， Mass-MetaSite 根据母体化合物的化学 0.25 mM : • Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (TCC) 再加入5 µL 的NADPH-GS 溶液。所得溶 结构所得的潜在代谢物列表，以及 Mass- 液经涡旋振荡后，在 37 ° C 下分别孵育