安徽医科——药理实验设计与临床毒理学方法.ppt

药理实验设计与临床毒理学方法 严 尚 学 安徽医科大学临床药理研究所 药理实验设计及统计分析 药理实验设计的基本要求 重复原则：包括重现性、重复数 药理实验应尽量减少干扰因素对实验的影响，严格按照GLP、GCP相关要求开展研究工作。 随机原则 完全随机 均衡随机 对照原则 阴性（空白）对照、安慰剂对照 阳性（标准）对照 自体对照与组间对照等 客观性原则 实验设计时要力戒主观偏性干扰，选择观察指标时，不用或尽量少用带主观成分的指标。 实验设计方法 单组比较设计：在同一个体上观察实验处理前后某种观测指标的变化。 配对比较设计：实验前将性别、体重或其他相关因素加以配对，以基本相同的两个个体为一对，配成若干对，然后分别将每对个体随机分配于两组中。 随机区组设计：为配对设计的扩大 完全随机设计：用随机数字表等方法完全随机化分组。 交差实验设计： 正交实验设计：研究多因素试验的一种设计方法，适用于多因素、多水平、试验误差大、周期长的一类试验的设计。 拉丁方设计 随机数字法分组 动 物 编 号 随机编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 随机数字 8 6 4 7 10 13 7 7 6 2 11 4 2 12 9 除以3的余数 2 0 1 1 1 2 1 1 0 2 2 1 2 0 0 初步分组 c a b b b c b b a c c b c a a 表中b组为6只，a组为4只，需再调整，再抄写下一数字，将其数字除以6得余数为几即挑第几只放入第三组。 正交设计方法（举例） L4（23）正交设计表 预试与筛选 预试 充分重视预试的重要性，目的在于检查各项准备工作是否完善，实验方法和步骤是否切实可行，测试指标是否可靠，初步了解实验结果与预期结果的距离，从而为正式实验提供补充、修正的意见和经验，提高实验的重复稳定性和灵敏度。但是，预试验的结果不能归入正式试验的最后结果一同分析。 筛选 筛选是在预试或既往经验的基础上，用少量动物对多数药物进行实验。包括保护实验和概率判别实验。 药理实验设计中的样本问题（一） 实验动物的基本例数 小动物（小鼠、大鼠、鱼、蛙等）每组10~30例：计量资料每组不少于10例，计数资料每组不少于30例； 中等动物（豚鼠、家兔）每组8~20例：计量资料每组不少于8例，计数资料每组不少于20例； 大动物（犬、猫、猪、羊）每组6~20例：每组不少于6例，计数资料每组不少于20例； 药理实验设计中的样本问题（二） 临床药效比较的基本例数 公认难以治愈的疾病（cancer、狂犬病等）：5~10例； 危急严重的疾病（休克、心力衰竭、流行性脑脊膜炎等）：30~50例即可 一般慢性疾病（哮喘、冠心病、流行性感冒等）：计数资料需100~500例 临床实验基本例数意见不一，不同疾病不同药物有时出入很大，出具结论应慎重。 药理实验设计中的样本问题（三） 按统计学方法测算样本数 （1）配对试验样本数的确定 n=[(t0.05·sd)2]/d2 其中：sd为前人试验或经验所得各组间差异的方差 d为要求达到所预期的差异显著时的均数差值 t0.05为一定的df下，α=0.05的T值 首次估计将用n≥30，t=2代入 （2）非配对试验动物样本数的确定 n=[(t0.052·（s1+s2)]/（x1-x2）2 其中： s1、s2为试验或经验所得的两组的样本标准差 x1-x2为要求达到所预期的差异显著时的均数差值 t0.05为一定的df下，α=0.05的T值 首次估计将用n≥30，t=2代入 药理毒理学研究中的剂量问题 最适剂量的探索 进行药效对比时一般选用中效剂量，进行解毒或拮抗实验时剂量可略高一些，协同实验宜略低一些； 探索最适剂量时，应由小量开始。一般而言，离体器官上按3倍或10倍递增，整体实验按2倍或3.16倍递增； 已知高低剂量时，中剂量可选用其算术平均值 药理毒理学研究中的剂量问题 安全剂量的探索 由动物实验中该药与已知药物的效价比值推算； 应